Обзор авто Infiniti QX50 — фото и видео, описание и характеристики автомобиля Инфинити QX50 в Москве от официальных дилеров
Сильный и элегантный Infinity QX50
Данный люксовый компактный кроссовер от известной японской автомобильной компании был представлен мировой публике в 2013 году в автосалоне в китайском Нанкине. В том же году авто появилось в продаже в России. Это первый автомобиль в линейке, получивший турбированный двухлитровый мотор с изменяемой компрессией. Второе поколение модели вышло в 2017 г.
В дизайне авто выделяются матричные светодиодные фары, решетка радиатора типа «двойная арка». В целом внешний вид кроссовера «мускулистый» и сбалансированный. Фирменный стиль бренда можно также узнать по изогнутым в форме полумесяца задним стойкам.
Всего комплектаций у Infinity QX50 девять, среди которых в каталоге на сайте представлены Pure, Luxe, Sensory и пр. Двигатель машины бензиновый, мощностью 249 л. с. и объемом 2 л. Коробка переключения передач устанавливается вариаторная. Привод в любой модификации полный. Расход топлива – 8,6 л на 100 км пути. Объем багажника – 565 л. Клиренс – 217-220 мм.
Преимущества покупки Инфинити Ку Икс 50
- высокий уровень комфорта: двухзонный климат-контроль, электропривод крышки багажника, сиденье водителя регулируется в 10 направлениях;
- самый просторный салон в классе – если откинуть задний ряд сидений, объем багажника составит 1048 л;
- ряд решений для обеспечения безопасности: 4-канальная ABS, система помощи при экстренном торможении, 8 подушек безопасности и пр.
Интернет-площадка AutoSpot дает возможность оформить заявку на новый Инфинити QX50 у проверенного автодилера, не выходя из дома. Покупатели получают массу различных бонусов, сотрудничая с официальными автомобильными салонами. В свою очередь, AutoSpot предлагает 12% скидку на авто, а также бесплатную запись на тест-драйв.
Тест-драйв Infiniti QX50 2020 года. Обзоры, видео, мнение экспертов на Automoto.ua
Добавлено: 09.04.2020
- {{ slotProps.data.views }}
Infiniti QX50 2020 года — это компактный внедорожник класса люкс. QX50 имеет вместительный и стильный салон, удобные сидения, большой грузовой отсек и много стандартных технических функций и систем безопасности. Но эта модель не лишена недостатков.
Б/у авто
$17 875 — $36 900
Новые авто
$43 492 — $62 081
Новое в 2020 году
- 80% Дорожные тесты
- 95 % Надежность
- 81 % Удовлетворенность водителей
- Apple CarPlay и Android Auto добавили в стандартную комплектацию
- В базовых моделях 2020 года появились дополнительные функции безопасности
Кому стоит купить?
Infiniti QX50 оборудован всеми необходимыми функциями, чтобы обеспечить комфортную езду в разных дорожных условиях.
Новое или б/у авто?
Куда проще сделать выбор между моделями 2019 и 2020 г.в. Новый QX50 оборудован сервисами Apple CarPlay и Android Auto, которые не были доступны ранее. В 2020 году QX50 также получил больше стандартных функций безопасности, включая мониторинг слепых зон и предупреждение о выезде с полосы движения. Если вам необходимы перечисленные функции, выбирайте новый Infiniti QX50.
Infiniti QX50 или Acura RDX?
Infiniti QX50 или Mercedes-Benz GLC?
Infiniti QX50 или Infiniti QX60?
Салон
В салоне кроссовера Инфинити Ку Икс 50 можно вместить до 5 человек. Интерьер QX50 выполнен из высококачественных материалов. Салон модели в стандартной комплектации имеет обивку из искусственной кожи, но также доступно покрытие из натуральной кожи и подогрев сидений.
Infiniti QX50 поставляется с информационно-развлекательной системой Infiniti InTouch с двумя сенсорными экранами. В перечень стандартных функций входят Apple CarPlay, Android Auto, Bluetooth, четыре порта USB, стерео с 6 динамиками, спутниковое радио, CD-проигрыватель и двухзонный автоматический климат-контроль. Также предлагается навигация и акустическая система Bose с 16 динамиками.
Стоит отметить, что эта система неудобна в использовании. Оба сенсорных экрана имеют графику низкого разрешения и медленно реагируют на нажатия.
Видео тест-драйв Infiniti QX50 2020 года
Технические характеристики
QX50 оборудован четырехцилиндровым двигателем с турбонаддувом Infiniti VC-Turbo мощностью 268 лошадиных сил. Этот силовой агрегат может на ходу адаптироваться к вашей манере вождения, чтобы обеспечить более экономный расход топлива. На разработку этой системы ушло более двух десятилетий.
Infiniti QX50 быстро разгоняется и имеет хорошую проходимость на шоссе. Все вариации этой модели оснащены бесступенчатой автоматической коробкой передач (CVT) и передним приводом.
QX50 расходует 10.2 л и 8.1 л на 100 км по городу и на шоссе соответственно.
Этот внедорожник сохраняет устойчивость на поворотах и обеспечивает прекрасную езду по неровному дорожному покрытию. Ку Икс 50 в режиме Tow Mode может буксировать до 1360 кг. Эта опция доступна только в комплектации QX50 Autograph с полным приводом.
Безопасность
QX50 поставляется в стандартной комплектации с камерой заднего вида, парктрониками, а также системами обнаружения пешеходов, автоматического экстренного торможения, предупреждения о выезде с полосы движения, мониторинга слепых зон, предупреждения о перекрестном движении сзади и автоматическим дальним светом.
Дополнительные функции помощи водителю включают в себя проекцию дисплея на лобовое стекло, распознавание дорожных знаков, адаптивные поворотные фары, помощь в удержании полосы движения, адаптивный круиз-контроль, парктроники и камеру с объемным обзором. Также эта модель оборудована адаптивным рулевым управлением Direct Adaptive Steering и полуавтономным режимом вождения ProPilot Assist. Эти функции дополняют действия водителя, помогая придерживаться выбранной полосы и следовать разметке на дороге.
Размеры и вес
QX50 имеет длину 4,69 метра. Его снаряженная масса составляет от 1730 до 1860 кг.
Возможные комплектации
Модель QX50 2020 года доступна в пяти комплектациях: Pure, Luxe, Essential, Sensory и Autograph. Все вариации поставляются с 268-сильным четырехцилиндровым двигателем, бесступенчатой автоматической коробкой передач и передним приводом. Вы можете добавить полный привод за 2000 долларов.
Перейти к объявлениям Инфинити QX50 Перейти к объявлениям Инфинити QX50Это произведение доступно по лицензии Creative Commons «Attribution-ShareAlike» («Атрибуция — На тех же условиях») 4. 0 Всемирная
Официальные дилеры Infiniti в Украине
Тест-драйв Infiniti QX50: сколько стоят технологии
Я не то чтобы фанат Infiniti, но признаюсь – есть у меня к этому бренду какая-то предрасположенность. Мне нравится, что делает компания в последние годы, разве что за исключением… QX50. Эта модель для меня всегда была непонятной – в первом поколении QX50 выглядел как раскачанный хэтчбек, и было похоже, что его дизайн устарел еще в тот момент, когда его дизайнер сел за монитор. Или судя по подходу – за кульман. Но это мое личное мнение, испорченное профессией. А вот девушкам машина понравилась, и в Киеве можно было часто встретить QX50, управляемый очаровательным созданием. Надо признать, они подходили друг другу идеально. Поэтому предложение протестировать второе поколение QX50 я встретил без особого энтузиазма, хотя, конечно, уже был готов к тому, что автомобиль серьезно изменился. Но в итоге оказалось, что не серьезно, а просто-таки кардинально.
Короче, выше, шире
Надеюсь, главный дизайнер нового QX50 – это не тот самый упомянутый мной выше товарищ с кульманом, иначе мне бы сейчас пришлось извиняться за ёрничание. Художникам Infiniti удалось пробалансировать на тонкой грани, которая отделяет традиции от архаичности. QX50 – это чистый Infiniti, с его классическими перекатами на капоте, знакомой решеткой и покатой крышей, но посмотрите на эти фары, на острые грани на боках, вызывающие задние стойки.
Новая решетка радиатора, «человеческий взгляд» – это уже дополнения. Главное – изменились не только пропорции кузова, но и его общее восприятие – благодаря новым формам и граням
Машина стала короче на 51 мм, а колесная база уменьшилась на все 80 мм. При этом автомобиль стал выше на 64 мм и шире на 102 мм, приобретя классические очертания современного спортивного кроссовера. Сразу отмечу, что места в ногах пассажиров особо меньше не стало, а вот лишние миллиметры в ширину заметны – в салоне теперь просторнее. Но это не главное изменение. Салон у нового QX50 просто роскошный. Да, у нас на тесте была самая крутая версия Autograph, с белой полуанилиновой кожей, синей замшей Ultrasuede и белым кленом.Салон QX50 без преувеличения шикарен: тут хорошо все, и архитектура, и качество материалов, и подбор цветов
Это сыграло свою роль в оценке, но и без этих материалов все выглядит отлично.Аналог не в моде?
Конечно же, автожурналисты и тут нашли к чему придраться – мол, два экрана на центральной консоли – привет из девяностых, а аналоговые приборы – это вообще моветон.
Два монитора один над другим – вроде бы уже и не модно, но как по мне – смотрится неплохо
Может, и так. Но мне нравится, я бы только поработал немного с качеством мониторов, чтобы оно было хотя бы одинаковым – сейчас нижний отличный, а вот верхний, с навигацией – отстает.Верхний, навигационный монитор не так хорош, как нижний. Но к работе самой навигационной системы – никаких вопросов
Только по качеству картинки, сама навигация работает нормально. А приборы… Возможно, я ретроград, но мне нравится, и информационный дисплей между приборами красивый и информативный.Вы действительно считаете, что электронные шкалы приборов здесь смотрелись бы лучше?
В целом в салоне стало уютно и празднично одновременно, это не холодная скандинавская красота или строгий немецкий стиль, здесь все очень душевно, но также качественно и богато.Первый в мире
Все это очень важно и нужно, но это лишь внешний антураж. Тогда как и технически Infiniti QX50 – очень продвинутый. Начнем с того, что QX50 – первый в мире серийный автомобиль, оснащенный двигателем с изменяемой степенью сжатия. На схеме все выглядит просто, шатуны цилиндров не напрямую подсоединены к коленвалу, а через многорыжачную схему, позволяющую изменять высоту хода поршней. Коэффициент сжатия при этом изменяется в параметрах от 8:1 до 14:1. При низкой степени сжатия обеспечивается высокая мощность и крутящий момент, при высокой – хорошая экономичность. На самом деле это сложнейшая конструкция, над решением данной задачи инженеры бились два десятка лет. И вот результат – первый серийный двигатель VC-Turbo.
Помимо основной фишки есть еще одна интересная особенность – система гашения колебаний, благодаря которой вибрационный шум VC-Turbo составляет 10 Дб – на 20 меньше, чем у аналогичных классических четырехтактных моторов. Двигатель работает в паре с вариатором X-Tronic CVT с имитацией восьми передач в режиме ручного переключения. Мало того, новый QX50 оснащается системой рулевого управления DAS без жесткой сцепки рулевой колонки и управляемых колес, хорошо известной нам по модели Q50. Только обычная «пятидесятка» заднеприводная, а наш QX – полноприводный. «По умолчанию» у него ведущая передняя ось, а на заднюю при необходимости перебрасывается до 50% крутящего момента. Это уже четвертое поколение DAS, и как будет вести себя машина с ведущими передними колесами и управлением «по проводам» было очень интересно. Не тест, а полнейшая неожиданность.
Вместо рычага КПП у QX50 – маленький и удобный джойстик, с классическими режимами, только «паркинг» как у Mercedes – активируется не джойстиком, а отдельной кнопкой.
К чувствительному джойстику пришлось привыкать, но зато сама композиция органов управления смотрится отлично, да и с точки зрения эргономики все ок
Чуть ближе джойстика расположена клавиша выбора режима движения – экономичный, спортивный, нормальный и персональный (настраиваемый). Правее – шайба Infiniti controller управления мультимедийной системой. Если не очень удобно управлять передачами джойстиком – есть и подрулевые переключатели, причем в отличие от большинства моделей Infiniti, расположенные не на рулевой колонке, а на руле. Я ими все равно пользовался минут десять чисто из спортивного интереса – работа вариатора в этой модели меня устроила полностью (не думал, что вообще когда-то скажу такое про вариатор).В чем прорыв?
Двухлитровый четырехцилиндровый VC-Turbo (интересно, что даже в технических характеристиках его объем указан как 1970-1997 «кубиков») выдает 249 л.с. при 5600 об/мин и обладает крутящим моментом 380 Нм при 4400 об/мин. Знавали мы двухлитровые моторы и помощнее – например, хондовский VTEC Turbo выдает 305 л.с., а вольвовский Т9 и вовсе 320 л.с., так что по части пиковой мощности мотор Infiniti хорош, но не впечатляющ. При этом для хорошей отдачи его еще надо хорошенько раскрутить. Что, впрочем, совсем не сложно – на педаль газа он откликается с веселой удалью, и тяжелый кроссовер легко срывается с места. Динамика отличная, хотя опять же – не рекордная, до «сотни» новый Infiniti разгоняется за 7,3 с.
Задние сиденья сдвигаются на 15 см – выбирайте сами, что для вас важнее в данной ситуации, просторанство для ног задних пассажиров или объем багажника
Координация работы вариатора и мотора прекрасна – все очень плавно, линейно, машина отлично чувствуется, мощно разгоняется, есть ощущение добротного сильного автомобиля. Но раз революция – значит, должно быть и нечто мега впечатляющее, и очевидно это – расход топлива? Но нет. Заявленные цифры расхода – от 7,6 л на 100 км на трассе до 10,5 л в городе. Очень неплохо, но до вау-эффекта немного не дотягивает – опять же можно взглянуть на показатели двигателей Volvo с двумя турбинами. На деле же все оказалось еще более сложно. Надо сразу уточнить, что у нас машина была чуть ли не с нулевым пробегом, наверняка после небольшой обкатки расход топлива еще снизится, ну и из-за ее темпераментного характера я так и не смог перейти на спокойный темп езды, но в итоге у меня в среднем расход получился в районе 14 л/100 км. Не очень вяжется с заявлениями о «экономичности дизельного мотора». Но если не гонять, а ездить спокойно, в десятку уложиться можно, что для авто с такой мощностью и весом под две тонны очень неплохо. Обещаю при возможности проверить расход еще раз – после обкатки.
По бортам
С DAS ситуация такая же, как и в Q50 – рулится машина отлично, можно отрегулировать усилие на руле на свой выбор, при наборе скорости реакция руля обостряется, в общем, картинка близка к эталонной – за исключением уже замеченного на Q50 «закусывания» в самом крайнем положении руля – ничего страшного, это скорее визуальный эффект, может так и задумано производителем, чтобы дать понять водителю, что вдаваться в крайности не стоит.
Машина на сухой дороге в обычных условиях ведет себя как переднеприводная, на снегу или льду подключается задняя ось, причем тут изменяется и распределение тягового усилия не только по осям, Active Brake Limited Slip перераспределяет крутящий момент между колесами левого и правого борта.
Не для Штатов?
По подвеске – тут уже как ни старался, придраться не к чему. Infiniti QX50 построен на новой платформе, хотя она подозрительно похожа на «тележку» Nissan Murano и Pathfinder. Спереди у QX50 теперь более простой и понятный макферсон вместо двухрычажной подвески, сзади – многорычажка. Не знаю, может быть для рынка США предлагаются автомобили с другими настройками, или и там уже меняются предпочтения, но мне машина показалась не по-американски собранной, здесь нет привычной для Штатов мягкости и плавности. Все, как мне нравится – упругий, отлично держащий трассу автомобиль, но, если вы вдруг увлеклись и не заметили лежачего полицейского, – за свои зубы переживать не стоит. Он все отработает, хотя конечно, злоупотреблять такими вещами не стоит. Подвеска наверняка придется по вкусу тем, кто предпочитает активный стиль вождения.
Стоп мотор
Иногда японцы делают очень похожие вещи даже в конкурирующих компаниях. В прошлый раз я был на грани инфаркта на тесте Lexus, и вот опять. Понятно, когда ты первый день тестируешь новый и очень дорогой автомобиль, ты несколько на взводе и больше внимания уделяешь безопасности – иногда это выражается в парковке в полуметре от бордюра, иногда в ожидании проезда там, где уже через два дня пролетаешь в щель между машинами не глядя. И вот в таком состоянии ты выезжаешь задним ходом с парковки и вдруг машина просто упирается задним бампером в нечто и замирает на месте, да так, что тебя впечатывает в спинку сидения. Все, приехали?
Оказывается, это просто в зону действия Backup Collision Intervention попал пешеход или автомобиль, двигающийся по пересеченному курсу. По идее QX сначала должен подать сигнал, а потом уже самостоятельно тормозить, но в наших условиях, когда люди и машины материализуются фактически из ниоткуда, часто происходит именно так. Из интересных фишек стоит отметить проекционный дисплей на лобовом стекле, систему кругового обзора, трехзонный климат-контроль, автоматическое переключение ближнего и дальнего света, интеллектуальный круиз-контроль, система предупреждения лобовых столкновений и отличную аудиосистему Bose c 15-ю динамиками.
Мощность аудиосистемы Bose Premium Sound – 450Вт
Считаем деньги
В общем, меня QX50 удалось убедить. Красивый современный автомобиль, с массой опций и передовых технологий. Друзьям можно будет невзначай обронить в разговоре про первый в мире двигатель и управление «по проводам», подругам ничего и говорить не надо: проверено, на такой салон они реагируют одинаково. Из прилагаемых бонусов – отличная подвеска, клиренс 217 мм, акустический комфорт, полный привод (он есть далеко не у всех конкурентов).
По минусам. Возможно, цена: в базовом оснащении QX50 стоит 1 250 320 грн. (все равно с кожей), а топовый Autograph Proactive – 1 727 810. Далее – отсутствие выбора модификаций, на нашем рынке машина доступна только с VC-Turbo, вариатором и полным приводом. Это уникальная троица, но может быть кто-то захотел бы и попроще. Так, базовый Lexus NX300, сопоставимый по мощности двухлитрового мотора (238 л.с.), стоит 1 402 788 грн., но у Lexus есть и NX200 за 1 131 677 грн., дохленький, но есть. Впрочем, QX50 все же заметно крупнее NX, и сравнивать его стоит скорее с RX, а там базовая стоимость RX300 изначально выше – 1 424 258. Но у RX опять же четыре варианта мощности, а у QX50 – одна. У европейцев – та же история, Volvo XC60 в цене стартует с 1 302 125 грн., уже немного дороже, но версия с автоматом и полным приводом обойдется минимум в 1 503 685 грн. В общем, если брать уже в рамках модификации и уровня оснащения, то и по цене Infiniti QX50 весьма конкурентоспособен.
Похожие записи
Технические характеристики Infiniti QX50
Infiniti QX50 MY19 (SENSORY/AUTOGRAPH) | |
Тип привода | Интеллектуальный полный привод (AWD) |
Тип двигателя | Бензиновый |
Рабочий объем, см3 | 1970–1997 |
Число и расположение цилиндров, газораспределительный механизм | Инновационный 4-цилиндровый двигатель VC-Turbo с изменяемыми фазами газораспределения и турбонаддувом |
Мощность, л. с./кВт @ об/мин | 249/183 кВт @ 5600 |
Крутящий момент, Нм | 380 (при 4400 об/мин) |
Трансмиссия | Гидромеханическая |
Подвеска спереди | Независимая пружинная, типа McPherson, со стабилизатором поперечной устойчивости |
Подвеска сзади | Независимая пружинная, многорычажная, с гидравлическими телескопическими амортизаторами, со стабилизатором поперечной устойчивости |
Макс. скорость, км/ч | 220 |
Разгон 0—100, км/ч, cек. | 7,3 |
Расход топлива, л/100 км, Город/трасса/комбинированный | 10,5/7,6/8,6 |
Габариты, мм Длина/высота/ширина | 4693/1678/1903(2161) |
Колесная база, мм | 2800 |
Дорожный просвет, мм (спереди/сзади) | 217,2 / 221 |
Диаметр разворота, м | 11,2 |
Cнар. масса, кг | 1884–1986 |
Объем багажника, л | 565 |
Емкость топливного бака, л | 60 |
Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.
Отзывы владельцев об автомобилях Infiniti QX50 (Инфинити ку икс 50) на Авто.ру
Плюсы
15 плюсов
3 Дизайн
2 Динамика
2 Вместительность салона
2 Надежность
2 Управляемость
Минусы
4 минуса
1 Обзорность
1 Безопасность
1 Багажник
1 Проходимость
Все плюсы и минусы
Покупка и начало эксплуатации…
Infiniti QX50 2.5 AT (222 л.с.) 4WD
Уважаемые «сосайтники» и автолюбители! Пишу подобный отзыв впервые, поэтому прошу вашего снисхождения… Итак приступим. Пролог. Мне 36, стаж с 2007г., автомобили, которыми владел (для понима
СУПЕР АВТО!!!
Infiniti QX50 3.7 AT (330 л.с.) 4WD
Всем очень здрасти. Решил написать отзыв т.к. информации о данном авто крайне мало, а не вполне заслуженных стереотипов слишком много. Приобрел машину не так давно. Купил не новую, но у официалов,
Воспоминания о Финике:)
Infiniti QX50 2.5 AT (222 л.с.) 4WD
Всем, доброго времени суток!
Японское качество
Infiniti QX50 2.5 AT (222 л.с.) 4WD
Был владельцем данного авто 10 месяцев,- подвернулся по приемлемой цене с пробегом 78 т.км. и одним владельцем, свою продал (КИА Спортейдж 2011 г.в.) и нужны были колёса,- решил сразу, что эту возьму
Доволен
Infiniti QX50 2.5 AT (222 л.с.) 4WD
Вот и настал замечательный момент, покупка новой машины… До этого владел: Nissan X-trail 2007 г.в. ; Ford kuga (2) 2013 г.в. Кратко о Nissan X-trail Т31 двиг 2.0 бензин, 4 wd мкпп — мягкий, прос
Прекрасный авто!
Infiniti QX50 2.5 AT (222 л.с.) 4WD
Покупалась после эксплуатации немцев, подвеска ангельская, любая кочка, ямка, рельса — пушинка! Очень качественная сборка, детали! Хотите забыть о вечных авторемонтах — Вам в клуб фиников! Ну и коне
QX-50
Infiniti QX50 2.0 CVT (249 л.с.) 4WD
До «финика» ездил на «мерене» GLC 220d (тоже классный автомобиль), вот только после гарантии (2 года )из сервиса не вылазил, то подшипник промежуточный, то привод, диски тормозные, катализатор. 70 000
Infiniti QX50
Infiniti QX50 2.5 AT (222 л.с.) 4WD
Хороший надёжный авто с относительно недорогой стоимостью обслуживания.Из минусов:небольшая вместимость багажника (Для владельцев с маленькими детьми, кроме коляски мало, что ещё уместится) и расход
Отличный авто для дома, отдыха и работы
Infiniti QX50 2.5 AT (222 л.с.) 4WD
Пользуюсь автомобилем достаточно давно, за время эксплуатации не было ни одной внеплановой поломки. Если вовремя обслуживать автомобиль в нормальных официальных сервисах, то проблем не будет. Любой ав
До этой крохи у меня было не мало машин))). Да и стаж у меня не маленький. Такого класса у меня эта машина первый раз. Восторг от рычания мотора))). В салоне все сделано со вкусом.
Infiniti QX50 2.5 AT (222 л.с.) 4WD
Ездить одно удовольствие ))). До этой крохи у меня было не мало машин))). Да и стаж у меня не маленький. Такого класса у меня эта машина первый раз. Восторг от рычания мотора))). В салоне все сделано
Всё о Infiniti QX50
Рейтинг модели — 4.9 / 5
Показать все — 20
Переводчик – словарь и онлайн перевод на английский, русский, немецкий, французский, украинский и другие языки. | ★ Как перевести «infiniti qx50 2019 тест драйв
Пользователи также искали:
инфинити, отзывы, цена, 2018 отзывы, конфигурации, инфинити qx50 2019, инфинити qx50 2018, infiniti qx50 2019 отзывы, infiniti qx50 отзывы, infiniti qx50 2019 цена, infiniti qx50 2018 отзывы, infiniti qx50 конфигурации, инфинити qx50 2018 видео, новый, тест драйв, infiniti qx50, тест, драйв, инфинити qx50, infiniti qx50 тест, драйв infiniti qx50, драйв infiniti qx50 2019, infiniti, обзор, qx50, драйвы, форум, фото, infiniti qx50 2019, инфинити qx50 тест драйв,
Недостатки нового Инфинити Ку Икс 50 выявили на тест-драйве
Американская организация Consumer Reports, специализирующаяся на изучении потребительских свойств различных товаров, может похвастать очень мощным автомобильным подразделением, которое регулярно выпускает обзоры, отчеты и рейтинги надежности автомобилей. На этот раз специалисты CR устроили тест нового Infiniti QX50.[sc name=”GA beginning article”]
Стоит отметить, что CR не сотрудничает с производителями товаров и покупает тестовые образцы исключительно в качестве стороннего незаинтересованного покупателя на собственные средства, поэтому можно говорить о высокой доле объективности их исследований, хотя слепо принимать за абсолютную истину эти выводы также не стоит, поскольку элемент субъективности в любом случае присутствует.
Итак, как выяснилось, к качествам нового кроссовера Инфинити можно предъявить целый букет претензий, и прежде всего, удручает поведение автомобиля в поворотах. Рулевое управление у нового QX50 слишком легкое, не обеспечивающее достаточной отзывчивости и точности. Плюс, настораживают серьезные крены кузова.
Далее в списке недостатков идет новенький четырехцилиндровый мотор, который, по заявлениям производителя, должен показывать мощность V6 и экономичность I4. На практике же все оказывается не совсем так – при ускорении на прямой трассе агрегат проявляет себя неплохо, но все равно не на равных с конкурентами.
Затем проблем владельцу Infiniti QX50 добавит управление функциями автомобиля. Разработчики установили на центральной консоли целых два сенсорных экрана, что может понравиться фанатам современных гаджетов, но явно не прибавляет удобства и откровенно сбивает с толку. Нижний дисплей отведен под управление климатом и музыкой, а верхний под навигацию и телефон. Также управлять ими можно через “шайбу” между сиденьями.
К чести японских инженеров испытатели отметили отличную шумоизоляцию и уют салона, отделанного мягкими материалами и натуральной кожей.
Обзорность Infiniti QX50 не выдающаяся, нижние части передних стоек могут за собой спрятать очень многое, а ниспадающая линия крыши ограничивает видимость сзади, Зато, в помощь водителю отряжена система кругового обзора на 360* через камеры, упрощающая маневры в ограниченном пространстве.
первое ТО и зимние проблемы
Рассказываем, как главная новинка Infiniti 2018 года прошла суровые испытания российской зимой, выдержала небывалые снегопады и успела побывать на сервисе.
Максим Федоров
Infiniti QX50 Цена: 2 799 000 р. В продаже: c 2018 г.
Первое, о чем машина напомнила мне, когда я забирал ее из пресс-парка, — ТО. На одометре к тому времени было около 8000 км, и обслуживание, по мнению бортового компьютера, необходимо было сделать не позже, чем через 2000 км. Отлично, с учетом перегона из Москвы до Петербурга и обратно, у меня в запасе будет порядка 500 км. На деле же оказалось и того меньше: электроника ежедневно пересчитывает пробег до ТО в зависимости от интенсивности эксплуатации и может как увеличить его, так и уменьшить. В моем случае она выбрала последнее. Так что всего через месяц я уже гнал машину обратно в пресс-парк — перегон вышел ровно вдвое дешевле, чем если бы я менял масло и фильтр у питерского дилера самостоятельно (стоимость процедуры приведена в таблице). Сейчас на одометре уже больше 14 тысяч км, и уже в конце лета придется делать следующее ТО. Так что будущим владельцам Infiniti (и речь не только о QX50) нужно быть готовым посещать дилера как минимум дважды в год.
Замена масла — каждые 10 000 км.
Знаю, что многие автовладельцы сами предпочитают менять масло как можно чаще, дабы поберечь мотор. Я же не возьму в толк, почему условия эксплуатации в российских мегаполисах так сильно хуже тех же условий в мегаполисах других стран. Пробки, некачественное топливо, грязь? Да, всего этого у нас в избытке, хотя здесь производители больше перестраховываются. Страна у нас большая, и если европейскую часть России еще можно сравнить с Западом в плане качества дорог и бензина, то в других регионах такое сравнение уже не прокатит. Вот и выдают производители усредненные интервалы ТО раз в 10 000 км. Хотя не все — в основном это водится за «японцами» и «французами», в то время как «немцы» не чураются в 1,5 раза больших интервалов. Так, к примеру, Infiniti QX30 нужно обслуживать каждые 10 000 км, а технически идентичный Mercedes-Benz GLA — раз в 15 тысяч.
Выше этой отметки средний расход не поднимался.
Мне же дополнительный «сервисный» перегон пошел бонусом к общим впечатлениям о машине, позволив лишний раз убедиться в том, насколько QX50 комфортен на трассе. Причем речь идет не о банальном удобстве сидений или тишине в салоне (чего у этого кроссовера не отнять), а о целом комплексе факторов. Так, мощный турбомотор позволяет быстро и безопасно совершать обгоны, коих при езде по забитой фурами «межстоличной» трассе приходится делать бесчисленное множество. Адаптивный круиз-контроль дает возможность расслабиться на платном автобане, хотя умеет он лишь держать дистанцию (системы удержания в полосе здесь нет) и бесполезен в снегопад — автоматика попросту отрубается. Умеренный аппетит «турбочетверки» позволяет совершать длинные марш-броски: стартовав из Питера с полным баком, я спокойно пролетал весь «платник» М-11 и делал первую дозаправку уже в Тверской области. Да, новый 4‑цилиндровый турбомотор куда менее прожорлив, нежели его 6‑цилиндровый предшественник. Однако чудес экономии он не показал. Минимальный расход по трассе — 7,8 л/100 км, максимальный в городе по пробкам — 11,6. В принципе, достойные цифры для зимы, учитывая вес и мощность машины. Но от революционного двигателя с изменяемой степенью сжатия хотелось большего. Или я требую слишком много? Было заявлено, что расход топлива снижен на треть — так оно и есть. Говорили про меньший уровень вибраций и шумов — получили. А чудес никто не обещал.
Дистанционный запуск двигателя — вещь!
Температуру ниже минус 17 градусов этой зимой кроссовер не застал, но эти 17 выдержал спокойно. Именно в морозы я оценил всю пользу штатной системы дистанционного запуска, когда можно завести двигатель из окна дома и через пять минут сесть в уже прогретый салон с оттаявшими стеклами. Эта система, кстати, частично нивелировала просчет создателей новинки, «забывших» про электрический подогрев лобового стекла и заднего ряда сидений. Хотя, конечно же, никто ничего не забывал — просто для рынка США, который для Infiniti QX50 является приоритетным, все это не столь актуально, как, например, вентиляция передних кресел или панорамная крыша. Кстати, последняя опция в морозы показала себя не с лучшей стороны. От стекла веет холодом, поэтому его приходится задергивать шторкой. Тем более что и небом в такую погоду особо не полюбуешься — после уличных ночевок на стекле намерзает подтаявший снег, а образовавшаяся ледяная корка не только закрывает панорамный обзор, но еще и неприятно хрустит при проезде неровностей (по моим предположениям, хруст идет от обмерзших резиновых уплотнителей крыши).
Салон — как новенький. Искусственная замша порадовала износостойкостью.
Вариатор не доставил проблем.
В меню выбора режимов вождения нет главного — возможности настроить работу полного привода.
Еще один момент, который не предусмотрели конструкторы, — это возможность каким-либо образом регулировать работу системы полного привода. Даже у «Дастера» можно принудительно заблокировать межосевую муфту, здесь же задние колеса начинают помогать передним только после того как те срываются в пробуксовку. И хотя подключается задняя ось быстро, я на собственном опыте убедился: полный привод «постфактум» это не то, что нужно нашей зимой. В один из бесчисленных снегопадов мне нужно было уехать с дачи. Снега под колесами было почти по бампер, но уверенность в силе полного привода и цепких фрикционных шинах Nokian взяла верх. Нужно сказать, что уверенность эта была не беспочвенной: к тому времени я часто пробирался по заваленным снегом дорогам и ни разу не застревал. Но когда-то это должно было случиться — конечно, тогда, когда нужно было лететь в командировку и до посадки на рейс оставалось всего несколько часов. И вот когда машина плотно села на «брюхо», а попытки откопать колеса и выехать враскачку привели к тому, что она еще сильнее зарылась в снег, я почувствовал полную беспомощность. Я знал, что в небольшом перечне режимов вождения системы Drive Mode нет ни одного с приставкой Offroad, а вручную я не могу даже отключить противобуксовочную систему. К счастью, все закончилось хорошо: соседский «Ленд Крузер» выдернул меня как пушинку, но с тех пор я уже не считаю полный привод и дорожный просвет в 20 см достаточными для выживания в российских условиях.
«Липучка» Nokian хорошо гребет по снегу, но на льду без шипов уже не комфортно.
Спрятанный за эмблемой радар круиз-контроля быстро теряет работоспособность в снегопад.
Эксплуатационные расходы | |
Пробег автомобиля за время теста | 6500 км |
Средний расход топлива | 10,5 л/100 км |
Периодичность техобслуживания | 10 000 / 12 км/мес. |
Стоимость ТО у официального дилера (ТО-1/ТО-2) | 14 700 / 14 700 р. |
Стоимость ОСАГО для данного автомобиля | 12 650 р. |
Стоимость каско для данного автомобиля | 121 670 р. |
Транспортный налог | 18 675 р./год |
Стоимость 1 км с учетом пробега 20 000 км в год (топливо, ТО, ОСАГО, каско и транспортный налог) | 13,8 р./км |
Хочу получать самые интересные статьи
% PDF-1. 4 % 1190 0 объект> эндобдж xref 1190 727 0000000016 00000 н. 0000022525 00000 п. 0000022662 00000 п. 0000022809 00000 п. 0000022854 00000 п. 0000027561 00000 п. 0000027822 00000 н. 0000028006 00000 п. 0000028753 00000 п. 0000029185 00000 п. 0000029234 00000 п. 0000029283 00000 п. 0000029332 00000 п. 0000029381 00000 п. 0000029431 00000 п. 0000029457 00000 п. 0000029506 00000 п. 0000029555 00000 п. 0000029581 00000 п. 0000029630 00000 н. 0000029679 00000 н. 0000029728 00000 п. 0000029757 00000 п. 0000029795 00000 п. 0000029844 00000 п. 0000029892 00000 п. 0000029941 00000 н. 0000035953 00000 п. 0000036474 00000 н. 0000036866 00000 п. 0000037232 00000 п. 0000037562 00000 п. 0000046631 00000 п. 0000047264 00000 н. 0000047714 00000 п. 0000048216 00000 н. 0000049245 00000 п. 0000049667 00000 п. 0000049722 00000 п. 0000050159 00000 п. 0000057164 00000 п. 0000057217 00000 п. 0000057576 00000 п. 0000065907 00000 п. 0000066937 00000 п. 0000072611 00000 п. 0000073102 00000 п. 0000073504 00000 п. 0000073558 00000 п. 0000073903 00000 п. 0000082518 00000 п. 00000 00000 п. 0000098185 00000 п. 0000104131 00000 п. 0000110238 00000 п. 0000118258 00000 н. 0000118425 00000 н. 0000121096 00000 н. 0000122053 00000 н. 0000126324 00000 н. 0000129950 00000 н. 0000130514 00000 н. 0000130685 00000 н. 0000130883 00000 н. 0000131190 00000 н. 0000131589 00000 н. 0000131760 00000 н. 0000131940 00000 н. 0000132102 00000 н. 0000132264 00000 н. 0000132426 00000 н. 0000132588 00000 н. 0000132759 00000 н. 0000133289 00000 н. 0000133451 00000 н. 0000133621 00000 н. 0000133804 00000 н. 0000133966 00000 н. 0000134128 00000 н. 0000134290 00000 н. 0000134510 00000 н. 0000134681 00000 н. 0000134852 00000 н. 0000135202 00000 н. 0000135570 00000 н. 0000135903 00000 н. 0000136300 00000 н. 0000136462 00000 н. 0000136894 00000 н. 0000137203 00000 н. 0000137386 00000 н. 0000137557 00000 н. 0000137719 00000 п. 0000137881 00000 н. 0000138043 00000 н. 0000138226 00000 н. 0000138498 00000 н. 0000138669 00000 н. 0000138840 00000 н. 0000139023 00000 н. 0000139185 00000 н. 0000139356 00000 н. 0000139518 00000 н. 0000139689 00000 н. 0000139860 00000 н. 0000140022 00000 н. 0000140184 00000 н. 0000140346 00000 п. 0000140508 00000 н. 0000140679 00000 н. 0000140841 00000 н. 0000141003 00000 п. 0000141165 00000 н. 0000141807 00000 н. 0000141990 00000 н. 0000142152 00000 н. 0000142323 00000 н. 0000142506 00000 н. 0000142986 00000 н. 0000143337 00000 н. 0000143499 00000 н. 0000143670 00000 н. 0000143832 00000 н. 0000143994 00000 н. 0000144156 00000 н. 0000144318 00000 н. 0000144480 00000 н. 0000144642 00000 н. 0000144804 00000 н. 0000144966 00000 н. 0000145128 00000 н. 0000145311 00000 н. 0000145482 00000 н. 0000145653 00000 п. 0000145824 00000 н. 0000145995 00000 н. 0000146157 00000 н. 0000146319 00000 п. 0000146490 00000 н. 0000146652 00000 н. 0000146998 00000 н. 0000147160 00000 н. 0000147322 00000 н. 0000147484 00000 н. 0000147655 00000 н. 0000147817 00000 п. 0000147979 00000 н. 0000148150 00000 н. 0000148312 00000 н. 0000148483 00000 н. 0000148645 00000 н. 0000148807 00000 н. 0000148978 00000 н. 0000149149 00000 н. 0000149320 00000 н. 0000149482 00000 н. 0000149653 00000 н. 0000149918 00000 н. 0000150305 00000 н. 0000150601 00000 н. 0000150989 00000 н. 0000151151 00000 н. 0000151313 00000 н. 0000151816 00000 н. 0000151978 00000 н. 0000152430 00000 н. 0000152825 00000 н. 0000153278 00000 н. 0000153440 00000 н. 0000153602 00000 н. 0000153764 00000 н. 0000153926 00000 н. 0000154338 00000 н. 0000154500 00000 н. 0000154662 00000 н. 0000154824 00000 н. 0000155186 00000 н. 0000155348 00000 н. 0000155510 00000 н. 0000155962 00000 н. 0000156124 00000 н. 0000156396 00000 н. 0000156558 00000 н. 0000156720 00000 н. 0000157015 00000 н. 0000157177 00000 н. 0000157339 00000 н. 0000157501 00000 н. 0000157555 00000 н. 0000157732 00000 н. 0000157909 00000 н. 0000158135 00000 н. 0000158454 00000 н. 0000158684 00000 н. 0000159029 00000 н. 0000159200 00000 н. 0000159362 00000 н. 0000159533 00000 н. 0000159702 00000 н. 0000159997 00000 н. 0000160103 00000 п. 0000160301 00000 п. 0000160462 00000 н. 0000160709 00000 н. 0000160904 00000 н. 0000161066 00000 н. 0000161217 00000 н. 0000161523 00000 н. 0000161694 00000 н. 0000161920 00000 н. 0000162248 00000 н. 0000162522 00000 н. 0000162684 00000 н. 0000162846 00000 н. 0000163189 00000 н. 0000163351 00000 п. 0000163602 00000 н. 0000163764 00000 н. 0000163935 00000 н. 0000164450 00000 н. 0000164938 00000 н. 0000165109 00000 н. 0000165280 00000 н. 0000165463 00000 н. 0000165625 00000 н. 0000165796 00000 н. 0000165979 00000 н. 0000166150 00000 н. 0000166312 00000 н. 0000166474 00000 н. 0000166636 00000 н. 0000166798 00000 н. 0000166969 00000 н. 0000167131 00000 н. 0000167293 00000 н. 0000167455 00000 н. 0000167617 00000 н. 0000167779 00000 н. 0000167941 00000 н. 0000168112 00000 н. 0000168274 00000 н. 0000168527 00000 н. 0000168689 00000 н. 0000168869 00000 н. 0000169031 00000 н. 0000169489 00000 н. 0000169597 00000 н. 0000169911 00000 н. 0000170019 00000 н. 0000170385 00000 н. 0000170493 00000 п. 0000170806 00000 п. 0000170914 00000 н. 0000171227 00000 н. 0000171335 00000 н. 0000171644 00000 н. 0000171752 00000 н. 0000172025 00000 н. 0000172133 00000 н. 0000172337 00000 н. 0000172541 00000 н. 0000172745 00000 н. 0000172872 00000 н. 0000172980 00000 н. 0000173184 00000 н. 0000173388 00000 н. 0000173498 00000 н. 0000173606 00000 н. 0000173961 00000 н. 0000174069 00000 н. 0000174273 00000 н. 0000174477 00000 н. 0000174681 00000 н. 0000174885 00000 н. 0000175037 00000 н. 0000175149 00000 н. 0000175438 00000 н. 0000175546 00000 н. 0000175951 00000 н. 0000176059 00000 н. 0000176263 00000 н. 0000176467 00000 н. 0000176671 00000 н. 0000176875 00000 н. 0000177079 00000 н. 0000177252 00000 н. 0000177364 00000 н. 0000177738 00000 п. 0000177850 00000 н. 0000178292 00000 н. 0000178400 00000 н. 0000178604 00000 н. 0000178777 00000 н. 0000178889 00000 н. 0000179093 00000 н. 0000179297 00000 н. 0000179501 00000 н. 0000179631 00000 н. 0000179743 00000 н. 0000180184 00000 п. 0000180292 00000 н. 0000180496 00000 н. 0000180586 00000 н. 0000180694 00000 п. 0000180898 00000 н. 0000180988 00000 н. 0000181096 00000 н. 0000181530 00000 н. 0000181638 00000 н. 0000182098 00000 н. 0000182206 00000 н. 0000182410 00000 н. 0000182500 00000 н. 0000182608 00000 н. 0000183042 00000 н. 0000183150 00000 н. 0000183465 00000 н. 0000183573 00000 н. 0000183777 00000 н. 0000183981 00000 н. 0000184091 00000 н. 0000184199 00000 н. 0000184509 00000 н. 0000184617 00000 н. 0000184929 00000 н. 0000185037 00000 н. 0000185352 00000 н. 0000185460 00000 н. 0000185861 00000 н. 0000185969 00000 н. 0000186173 00000 н. 0000186377 00000 н. 0000186487 00000 н. 0000186595 00000 н. 0000186863 00000 н. 0000186971 00000 н. 0000187175 00000 н. 0000187265 00000 н. 0000187373 00000 н. 0000187705 00000 н. 0000187813 00000 н. 0000188140 00000 н. 0000188248 00000 н. 0000188675 00000 н. 0000188783 00000 н. 0000189201 00000 н. 0000189309 00000 н. 0000189727 00000 н. 0000189835 00000 н. 00001
00000 н. 00001
00000 н. 00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
0000193632 00000 н.
0000193740 00000 н.
0000194110 00000 н.
0000194218 00000 н.
0000194590 00000 н.
0000194698 00000 н.
0000194963 00000 н.
0000195071 00000 н.
0000195336 00000 н.
0000195444 00000 н.
0000195705 00000 н.
0000195813 00000 н.
0000196074 00000 н.
0000196182 00000 н.
0000196386 00000 н.
0000196476 00000 н.
0000196584 00000 н.
0000196788 00000 н.
0000196992 00000 н.
0000197123 00000 н.
0000197235 00000 н.
0000197626 00000 н.
0000197734 00000 н.
0000198312 00000 н.
0000198424 00000 н.
0000198664 00000 н.
0000198772 00000 н.
0000199010 00000 н.
0000199118 00000 н.
0000199361 00000 н.
0000199469 00000 н.
0000199707 00000 н.
0000199815 00000 н.
0000200053 00000 н.
0000200161 00000 п.
0000200908 00000 н.
0000201020 00000 н.
0000201796 00000 н.
0000201904 00000 н.
0000202132 00000 н.
0000202240 00000 н.
0000202464 00000 н.
0000202572 00000 н.
0000202799 00000 н.
0000202907 00000 н.
0000203134 00000 н.
0000203242 00000 н.
0000203466 00000 н.
0000203574 00000 н.
0000203942 00000 н.
0000204050 00000 н.
0000204415 00000 н.
0000204523 00000 н.
0000204727 00000 н.
0000204817 00000 н.
0000204925 00000 н.
0000205129 00000 н.
0000205333 00000 н.
0000205537 00000 н.
0000205668 00000 н.
0000205780 00000 н.
0000205984 00000 н.
0000206074 00000 н.
0000206182 00000 н.
0000206386 00000 н.
0000206516 00000 н.
0000206624 00000 н.
0000206828 00000 н.
0000207032 00000 н.
0000207159 00000 н.
0000207267 00000 н.
0000207881 00000 н.
0000207989 00000 н.
0000208079 00000 н.
0000208187 00000 н.
0000208391 00000 н.
0000208481 00000 н.
0000208589 00000 н.
0000208699 00000 н.
0000208807 00000 н.
0000209011 00000 н.
0000209215 00000 н.
0000209346 00000 н.
0000209454 00000 н.
0000209658 00000 н.
0000209862 00000 н.
0000210066 00000 н.
0000210192 00000 п.
0000210300 00000 п.
0000220093 00000 н.
0000220327 00000 н.
0000229435 00000 н.
0000229677 00000 н.
0000231050 00000 н.
0000231304 00000 н.
0000231326 00000 н.
0000231348 00000 н.
0000231370 00000 н.
0000231392 00000 н.
0000231414 00000 н.
0000231436 00000 н.
0000231458 00000 н.
0000231480 00000 н.
0000231502 00000 н.
0000231706 00000 н.
0000231796 00000 н.
0000231908 00000 н.
0000231962 00000 н.
0000232092 00000 н.
0000232222 00000 н.
0000232297 00000 н.
0000232421 00000 н.
0000232538 00000 н.
0000232617 00000 н.
0000232662 00000 н.
0000232749 00000 н.
0000232886 00000 н.
0000232974 00000 н.
0000233019 00000 п.
0000233119 00000 п.
0000233257 00000 н.
0000233385 00000 н.
0000233430 00000 н.
0000233522 00000 н.
0000233650 00000 н.
0000233790 00000 н.
0000233834 00000 п.
0000233957 00000 н.
0000234090 00000 н.
0000234183 00000 п.
0000234227 00000 п.
0000234365 00000 н.
0000234493 00000 п.
0000234580 00000 н.
0000234624 00000 н.
0000234710 00000 н.
0000234848 00000 н.
0000234972 00000 н.
0000235016 00000 н.
0000235112 00000 н.
0000235255 00000 н.
0000235377 00000 п.
0000235421 00000 н.
0000235505 00000 н.
0000235657 00000 н.
0000235769 00000 н.
0000235813 00000 н.
0000235900 00000 н.
0000236033 00000 н.
0000236127 00000 н.
0000236171 00000 н.
0000236253 00000 н.
0000236391 00000 п.
0000236497 00000 н.
0000236540 00000 н.
0000236642 00000 н.
0000236685 00000 н.
0000236784 00000 н.
0000236827 00000 н.
0000236929 00000 н.
0000236972 00000 н.
0000237062 00000 н.
0000237105 00000 н.
0000237232 00000 н.
0000237318 00000 н.
0000237361 00000 н.
0000237445 00000 н.
0000237550 00000 н.
0000237593 00000 н.
0000237637 00000 н.
0000237680 00000 н.
0000237723 00000 п.
0000237767 00000 н.
0000237881 00000 н.
0000237925 00000 п.
0000238033 00000 н.
0000238077 00000 н.
0000238185 00000 н.
0000238229 00000 н.
0000238273 00000 н.
0000238317 00000 н.
0000238361 00000 н.
0000238405 00000 н.
0000238501 00000 н.
0000238545 00000 н.
0000238644 00000 н.
0000238688 00000 н.
0000238781 00000 н.
0000238825 00000 н.
0000238922 00000 н.
0000238966 00000 н.
0000239072 00000 н.
0000239116 00000 п.
0000239235 00000 п.
0000239279 00000 н.
0000239376 00000 п.
0000239420 00000 н.
0000239525 00000 н.
0000239569 00000 н.
0000239690 00000 н.
0000239734 00000 н.
0000239842 00000 н.
0000239886 00000 н.
0000240029 00000 н.
0000240116 00000 п.
0000240160 00000 н.
0000240244 00000 н.
0000240339 00000 н.
0000240383 00000 п.
0000240427 00000 н.
0000240471 00000 н.
0000240559 00000 н.
0000240603 00000 н.
0000240680 00000 н.
0000240724 00000 н.
0000240815 00000 н.
0000240859 00000 н.
0000240964 00000 н.
0000241008 00000 н.
0000241112 00000 н.
0000241156 00000 н.
0000241251 00000 н.
0000241295 00000 н.
0000241395 00000 н.
0000241439 00000 н.
0000241538 00000 н.
0000241582 00000 н.
0000241675 00000 н.
0000241719 00000 н.
0000241809 00000 н.
0000241853 00000 н.
0000241897 00000 н.
0000241941 00000 н.
0000242043 00000 н.
0000242087 00000 н.
0000242212 00000 н.
0000242256 00000 н.
0000242358 00000 н.
0000242402 00000 н.
0000242499 00000 н.
0000242543 00000 н.
0000242627 00000 н.
0000242671 00000 н.
0000242762 00000 н.
0000242806 00000 н.
0000242850 00000 н.
0000242894 00000 н.
0000242994 00000 н.
0000243038 00000 н.
0000243137 00000 н.
0000243181 00000 п.
0000243225 00000 н.
0000243321 00000 н.
0000243365 00000 н.
0000243457 00000 н.
0000243604 00000 н.
0000243696 00000 н.
0000243740 00000 н.
0000243838 00000 н.
0000243882 00000 н.
0000243996 00000 н.
0000244040 00000 н.
0000244152 00000 н.
0000244196 00000 н.
0000244240 00000 н.
0000244284 00000 н.
0000244328 00000 н.
0000244372 00000 н.
0000244464 00000 н.
0000244508 00000 н.
0000244636 00000 н.
0000244790 00000 н.
0000244884 00000 н.
0000244928 00000 н.
0000245057 00000 н.
0000245138 00000 н.
0000245182 00000 н.
0000245264 00000 н.
0000245308 00000 н.
0000245403 00000 н.
0000245447 00000 н.
0000245536 00000 н.
0000245580 00000 н.
0000245678 00000 н.
0000245722 00000 н.
0000245814 00000 н.
0000245858 00000 н.
0000245947 00000 н.
0000245991 00000 н.
0000246083 00000 н.
0000246127 00000 н.
0000246227 00000 н.
0000246271 00000 н.
0000246315 00000 н.
0000246359 00000 н.
0000246446 00000 н.
0000246490 00000 н.
0000246593 00000 н.
0000246637 00000 н.
0000246733 00000 н.
0000246777 00000 н.
0000246865 00000 н.
0000246909 00000 н.
0000247008 00000 н.
0000247052 00000 н.
0000247151 00000 н.
0000247195 00000 н.
0000247296 00000 н.
0000247340 00000 н.
0000247435 00000 н.
0000247479 00000 н.
0000247575 00000 н.
0000247619 00000 н.
0000247710 00000 н.
0000247754 00000 н.
0000247798 00000 н.
0000247842 00000 н.
0000247936 00000 п.
0000247980 00000 п.
0000248111 00000 п.
0000248192 00000 н.
0000248236 00000 п.
0000248326 00000 н.
0000248370 00000 н.
0000248470 00000 н.
0000248514 00000 н.
0000248604 00000 н.
0000248648 00000 н.
0000248748 00000 н.
0000248792 00000 н.
0000248891 00000 н.
0000248935 00000 н.
0000249032 00000 н.
0000249076 00000 н.
0000249174 00000 н.
0000249218 00000 н.
0000249316 00000 н.
0000249360 00000 н.
0000249460 00000 н.
0000249504 00000 н.
0000249548 00000 н.
0000249592 00000 н.
0000249637 00000 н.
0000249719 00000 н.
0000249764 00000 н.
0000249809 00000 н.
0000249854 00000 н.
0000249899 00000 н.
0000249944 00000 н.
0000250065 00000 н.
0000250110 00000 н.
0000250155 00000 н.
0000250256 00000 н.
0000250298 00000 н.
0000250382 00000 н.
0000250424 00000 н.
0000015144 00000 п.
трейлер
] >>
startxref
0
%% EOF
1916 0 obj> поток
P = SM! Два рецензента соглашаются, что это очень интересная рукопись, которая проливает новый свет на физиологическую гетерогенность и, возможно, даже на пространственно организованные метаболические состояния в изогенной популяции дрожжевых клеток.Однако оба рецензента также поднимают важные вопросы и еще не полностью убеждены в представленных данных. Поэтому мы просим вас рассмотреть следующие важные вопросы: 1) Пожалуйста, предоставьте больше аргументов, средств контроля и обсуждений относительно предполагаемых метаболических состояний, особенно в отношении того, в какой степени они могут быть следствием пространственных градиентов. Следующие аргументы, элементы управления и обсуждения были добавлены в разделы «Введение», «Результаты» и «Обсуждение» исправленной рукописи. Введение (новые текстовые добавления): Введение имеет существенные включения текста, чтобы лучше объяснить существующие подходы и объяснения того, как возникают новые состояния клеток. Затем мы проясняем нашу гипотезу, представляя нашу точку зрения о том, как возможные биохимические ограничения могут контролировать появление клеток с различными состояниями, прежде чем подвести итоги наших выводов. Изменения, которые теперь включены в исправленный текст, приведены ниже для удобства: Введение, абзац первый: «Такая фенотипическая гетерогенность внутри групп клональных клеток позволяет нескольким микробам сохраняться в изменчивой среде, тем самым обеспечивая адаптивное преимущество для клеточного сообщества (Wolf et al., 2005; Thattai et al., 2004) ». Введение, абзац второй: «Однако, несмотря на поразительные описания природы и развития фенотипически гетерогенных состояний внутри групп клеток…» Введение, абзац третий: «В частности, многие исследования подчеркивают стохастические изменения экспрессии генов, которые могут приводить к фенотипической гетерогенности (Suel et al., 2007; Ackermann, 2015; Balázsi et al., 2011; Blake et al., 2003). Кроме того, группы клеток могут производить… » Введение, абзац третий: «или поддерживать возможные взаимозависимости (например, комменсальные или взаимные зависимости от общих ресурсов) в популяциях» (Ackermann, 2015).Такие исследования теперь дают представление о том, почему могут существовать такие гетерогенные группы клеток и каковы могут быть эволюционные преимущества ». Введение, абзац третий: «По сути, существуют ли простые химические или физические ограничения, вытекающие из существующих биохимических правил и ограничений, которые объясняют возникновение и поддержание гетерогенных фенотипических состояний групп клональных клеток в пространстве и во времени?» Введение, абзац четвертый: «Следовательно, если мы сможем понять, что это за биохимические ограничения, и различить, как метаболические состояния могут быть изменены с помощью этих ограничений, это может решить вопрос о том, как генетически идентичные клетки могут самоорганизовываться в различные состояния.« Введение, абзац пятый: «Избирательное использование этого ресурса делает возможным спонтанное появление и сохранение клеток, демонстрирующих противоречащее интуиции метаболическое состояние с пространственной организацией. Эти метаболические ограничения создают неотъемлемые пороговые эффекты, позволяя некоторым клеткам переключаться на новые метаболические состояния, в то же время ограничивая другие клетки до исходного состояния, которое производит ресурс. Таким образом, это приводит к общей самоорганизации клеток в специализированные, пространственно упорядоченные сообщества.Наконец, эта группа пространственно организованных, метаболически различных клеток дает коллективное преимущество роста сообществу клеток, что объясняет, почему такая пространственная самоорганизация клеток в различные метаболические состояния приносит пользу клеточному сообществу ». Изменений / дополнений в Результатах: Здесь мы добавили несколько соответствующих элементов управления и пояснения к тексту, а также результаты двух новых крупных экспериментов. Эти изменения кратко описаны ниже: Уточнение текста, касающееся первоначального описания морфологии колонии: «В настоящее время описание таких колоний ограничивается этой внешней морфологией морфологии и не описывает фенотипические состояния клеток и / или какую-либо пространственную организацию в колонии.” Пояснение к тексту об ожидаемом метаболическом состоянии клеток, выращенных на глюкозе: «Ожидаемые метаболические потребности клеток, растущих в условиях ограничения глюкозы, следующие:» Добавление новых экспериментальных данных (новый контроль, чтобы показать, что в выбранных условиях низкого уровня глюкозы степень глюконеогенеза всегда очень высока) и соответствующий текст: «Действительно, мы сначала подтвердили это второе предсказание, измерив количество глюконеогенных ферментов. Pck1 (фосфоенолпируваткарбоксикиназа) и Fbp1 (фруктозо-1,6-бисфосфатаза) с использованием краткосрочных жидких культур клеток либо в среде с высоким содержанием глюкозы, либо в той же среде с ограничением глюкозы, которую мы использовали для роста колоний.Ожидается, что мы наблюдали очень высокие количества этих глюконеогенных ферментов в клетках, растущих в среде с ограничением глюкозы (Рисунок 1 — рисунок в приложении 1A), повторяя, что даже в хорошо перемешанной среде с низким содержанием глюкозы клетки находятся в сильно глюконеогенном состоянии. Чтобы исследовать эту гипотезу, исследуя колонию для анализа ожидаемых метаболических потребностей в этих условиях, мы сначала разработали визуальные индикаторы для этих метаболических признаков роста дрожжевых клеток при низком уровне глюкозы ». Добавление дополнительных данных о распределении глюконеогенной активности по всей колонии, а не только по ее участку): «Это пространственное распределение глюконеогенной активности показано в виде гистограммы количественной тепловой карты, наложенной на всю колонию, на рисунке 1 — рисунок приложение 2А.Поскольку это наблюдение было основано исключительно на активности репортера, для более непосредственного изучения этого наблюдения […] » Пояснение к тексту данных о росте клеток: «Ожидается, что темные клетки устойчиво росли и достигли значительно большего количества клеток (0D 600 ) по сравнению со светлыми клетками в глюконеогенном состоянии (рис. 2A)». Разъяснение текста по интерпретации первоначальной характеристики двух метаболических состояний, наблюдаемых в темных или светлых клетках: «Хотя это был слишком простой и не окончательный эксперимент, противоречащий интуиции, этот результат предполагает, что, несмотря на пребывание в среде с низким содержанием глюкозы светлые клетки хорошо подходят для роста с высоким содержанием глюкозы и, следовательно, могут находиться в метаболическом состоянии, подходящем для роста глюкозы.Поэтому мы решили более систематически исследовать это явление ». Примечание: мы добавляем существенные новые данные и лучше характеризуем метаболические состояния, связанные с этим моментом. Это также подробно описано позже в ответе, а также как ответ на конкретный отзыв рецензента. Подраздел «Клетки организуются в пространственно ограниченные, противоположные метаболические состояния внутри колонии», в котором объясняются новые включенные данные, дополнительно характеризующие клетки в светлой области: «Это пространственное ограничение высокой активности PPP в колонии также отображается как наложенное количественное тепловое излучение. гистограмма -карта на рисунке 2 — приложение к рисунку 2A.Затем мы непосредственно рассмотрели возможность того, что эти легкие клетки проявляют относительно высокую активность PPP. Чтобы однозначно проверить это, мы использовали эксперимент с метаболическим потоком на основе стабильных изотопов, чтобы оценить поток в направлении PPP в светлых и темных клетках. Светлые и темные клетки, выделенные из колоний, подвергались импульсному воздействию 13 C-меченой глюкозы (в течение ~ 5 минут), метаболиты экстрагировались и включение этой углеродной метки в поздние промежуточные продукты PPP рибулозо-5-фосфат (R-5-P ) и седогептулозо-7-фосфат (S-7-P) измеряли с помощью жидкостной хроматографии / масс-спектрометрии (LC / MS / MS).Относительные количества этих меченных полностью углеродом промежуточных продуктов PPP сравнивали между двумя типами клеток (светлыми или темными). Примечательно, что светлые клетки включали значительно более высокие уровни 13 C-меченой глюкозы в метаболиты PPP по сравнению с темными клетками (Рисунок 2D и Рисунок 2 — приложение к рисунку 1B и см. Таблицу 2 для параметров МС), показывая, что светлые клетки являются в состоянии высокой активности ГЧП ». Текстовые пояснения для ряда элементов управления, выполненных с помощью моделирования модели, теперь включены в рукопись: «В моделировании был включен диапазон объемов ресурсов, темпов роста и распространения ресурса (см. Рисунок 3 — приложение к рисунку 1A-C). .” Уточнение текста: «(сценарий соломенного человека, поскольку изначально в реальной колонии все клетки были в темном состоянии, как показано ранее)». Новое добавление текста для лучшего описания выводов: «Из этой модели вытекают два простых вывода о таком пространственном распределении клеток в этих двух метаболических состояниях в развивающейся колонии». Добавление текста для лучшего описания эксперимента: для этого мы использовали стабильный изотоп, меченный трегалозой, и измерили поглощение, распад и утилизацию трегалозы.” Добавлен текст для пояснения результатов: «Действительно, меченые формы этих метаболитов были только выше предела обнаружения в темных клетках (Рисунок 5A и Рисунок 5 — приложение к рисунку 1A)». Важное пояснение по вопросам, касающимся поглощения трегалозы: «Примечание: в то время как Mal11 демонстрирует высокое сродство к трегалозе, у S. cerevisiae есть несколько транспортеров сахара с пониженным сродством к любому дисахариду. Следовательно, клетки, лишенные MAL11 , могут поглощать трегалозу с меньшей эффективностью.В этих клетках сохраняется способность расщеплять трегалозу. Что еще более важно, в колониях клеток, лишенных трегалозы ( Δnth2 ), и которые, следовательно, не могут эффективно расщеплять внутреннюю трегалозу, […] » Объяснение результатов включенного элемента управления в модель: «Это также ясно видно в имитациях управления с диапазоном объемов ресурсов и линейным переключением, как показано на рисунке 6 — рисунок дополняет 1A-1D. Напротив, в модели, которая успешно имитирует развитие колонии, […] » Пояснительный текст: «Таким образом, это побудило нас более внимательно изучить развитие реальных колоний с течением времени на предмет этих свойств.” Разъяснение результата: «Это быстрое снижение трегалозы после 4-го дня происходит, несмотря на неуклонное увеличение общего количества клеток в колонии (Рисунок 6 — рисунок в приложении 6E)». Важное объяснение ключевого результата, показывающего появление светлых клеток на поздней стадии развития колонии: «Эти данные также показывают, что периферическое расположение светлых клеток не может быть просто связано с возможным более широким доступом к глюкозе в среде, поскольку для Первые ~ 4 дня на периферии отсутствуют клетки с высокой репортерной активностью PPP.Их появление действительно быстрое и похожее на переключение ». Объяснение нашего результата: «Эти данные предполагают пороговый эффект, когда контролирующий ресурс, трегалоза, должен накапливаться выше определенного количества, чтобы клетки переключились на противоположное, состояние высокой активности PPP. Клетки в различных метаболических состояниях обеспечивают коллективное преимущество роста для колонии Новые важные данные (и новый рисунок), демонстрирующие явное преимущество для сообщества иметь эти отдельные, метаболически специализированные клетки: «Наконец, мы задались вопросом, может ли появление света клетки в этом состоянии с высокой активностью PPP могут принести пользу сообществу клеток в целом.Чтобы решить эту проблему, мы сравнили длительную экспансию колоний клеток дикого типа с колониями клеток, лишенных нейтральной треалазы ( Δnth2 ). Клетки в колониях Δnth2 не могут использовать трегалозу для производства глюкозы и, как показано ранее, останутся в глюконеогенном состоянии. Следовательно, в этих колониях клеток Δnth2 светлые клетки будут отсутствовать. Примечательно, что мы наблюдали, что по мере роста соответствующих колоний в течение продолжительных периодов времени (~ 21 день) колонии дикого типа распространялись на значительно большую площадь на чашке, в то время как колонии Δnth2 не могли расти так же эффективно (рис. 7А и 7В).Это показывает, что появление и размножение легких клеток важны для роста колонии. Поскольку темные клетки необходимы для появления и существования светлых клеток в совокупности, эти данные показывают, как сообщество использует клетки в различных метаболических состояниях для максимального роста и пространственного расширения, возможно, для получения новых питательных веществ ». Дополнений в Обсуждение: «Более четкое объяснение концепции, вытекающей из наших данных:« Неявная концепция, вытекающая из этого исследования, заключается в пороговых количествах контролирующего или дозорного метаболита, который регулирует переключение на новое метаболическое состояние.По определению, такой метаболит должен вырабатываться клетками, находящимися в определенном (исходном) метаболическом состоянии. […] Поскольку присущие клеткам свойства в различных состояниях различаются, возникает более глубокая возможность того, что эти преимущества проистекают из физических и химических свойств клеток, которые возникают из их различных метаболических состояний ». В ответ на комментарий рецензирующего редактора «с особым вниманием к тому, в какой степени они могут быть следствием пространственных градиентов»: Данные как наших экспериментальных данных, так и вычислительной модели убедительно свидетельствуют о том, что появление светлых клеток происходит из-за накопления порогового уровня трегалозы, которая продуцируется темными (глюконеогенными) клетками.Данные ясно показывают, что (а) если поглощение трегалозы или (б) использование блокируется / отменяется, практически не появляются клетки с высокой активностью PPP на периферии колонии (то есть в светлой области). Эти данные теперь гораздо лучше проиллюстрированы или объяснены. Во-вторых, что важно, светлые клетки появляются (довольно внезапно) только через 4 дня развития колонии. Таким образом, этот общий феномен предполагает, что наличие нового ресурса (трегалозы) необходимо для появления новых (легких) клеток.Модель эффективно подразумевает очень короткие реакционно-диффузионные системы (типа субстрата, обедненного активатором, поскольку трегалоза локально потребляется клетками, которые переключаются в световое состояние). Теперь мы лучше прояснили эти моменты в обновленном обсуждении. Тем не менее, возможно, что некоторые пространственные градиенты глюкозы в твердой агаровой среде все еще существуют, что может способствовать развитию легких клеток. Поскольку колония развивается в среде с низким содержанием глюкозы, мы постоянно видим развитие светлых клеток только на периферии колонии (рис. 2С).Более ранние исследования показали, что по мере развития колонии глюкоза в агаре под колонией полностью утилизируется делящимися клетками, и клетки на периферии имеют максимальный доступ к глюкозе, доступной на чашке (Regenberg et al., 2016) . Возможно, что эта остаточная глюкоза, присутствующая в чашке с агаром (области чашки, где колонии не выросли), в сочетании с глюкозой, полученной гидролизом поглощенной трегалозы (которая сама по себе имеет решающее значение для легких клеток), может объяснить почему светлые клетки преимущественно появляются на периферии колонии.Это, однако, в основном спекулятивно, но, учитывая обширные, многочисленные доказательства того, что трегалоза является контролирующим ресурсом (проявляется на уровне производства, поглощения, использования и уничтожения, на котором отсутствуют световые клетки), мы очень уверены в пересмотренном Результаты и обсуждение. 2) Не могли бы вы более подробно объяснить, что, по вашему мнению, является физиологической / эволюционной причиной различных состояний? Спасибо за это предложение, которое побудило нас изучить эту возможность более подробно.Вместо того чтобы строить предположения, мы представляем новые данные, которые прямо демонстрируют явное преимущество колонии в целом иметь клетки в светлом и темном состоянии. Эти новые данные заключаются в следующем: мы обнаружили, что присутствие светлых клеток имеет решающее значение для пространственного расширения колонии в течение более длительных периодов времени (измеряемых в течение ~ 21 дня). Теперь он включен как новый рисунок 7A. Примечательно, что колонии клеток, в которых отсутствуют легкие клетки штамма с делецией nth2 , которые не могут использовать трегалозу и не имеют легких клеток с высокой активностью PPP, не способны пространственно расширяться так же эффективно (как колония) по сравнению с колониями дикого типа.Это демонстрирует, что светлые клетки важны для общего кормового поведения, которое демонстрирует колония. Мы также знаем, что темные клетки сами по себе имеют решающее значение для появления светлых клеток, поскольку светлые клетки используют трегалозу, вырабатываемую темными клетками, для поддержания своего состояния высокой активности PPP. Таким образом, присутствие клеток в двух различных метаболических состояниях позволяет колонии пространственно расширяться, потенциально кормиться / перемещаться в области среды с большим доступом к глюкозе, и может рассматриваться как стратегия хеджирования ставок, при которой клетки с различным метаболическим состояния (светлые и темные клетки) позволяют колонии эффективно разрастаться и добывать питательные вещества. В исправленную рукопись добавлен соответствующий текст. 3) Пожалуйста, расширьте статистический анализ. Соответствующий статистический анализ был проведен для всех применимых наборов данных в этой рукописи. Статистические тесты, выполненные вместе с соответствующими значениями P, указаны в подписях к рисункам вместе с размером выборки для всех экспериментов. Пожалуйста, примите во внимание вопросы и комментарии отдельных рецензентов. Рецензент № 1: Результаты показывают, что в дрожжевой колонии клетки в определенной области колонии проявляют более высокую активность в пути глюконеогенеза (по оценке с использованием уровней Pck1 в качестве биомаркера), тогда как другие — нет. Дальнейшие эксперименты показывают, что так называемые «светлые» клетки показывают признаки клеток, которые активно растут на глюкозе, тогда как темные клетки, по-видимому, более голодны. Метаболическая модель используется, чтобы попытаться объяснить, как эти два разных состояния могут быть результатом того, что одни клетки производят глюкозу посредством глюконеогенеза, в то время как другие извлекают выгоду из этого ресурса, поскольку часть глюкозы (в форме трегалозы) диффундирует из клеток с высокий глюконеогенез.Удаление транспортера трегалозы Mal11 или трегалазы (Nth2) устраняет (или, по крайней мере, уменьшает) различия между двумя отдельными группами клеток. Мы благодарим рецензента за ценный вклад и отзывы, которые помогли улучшить рукопись. Мы учли все опасения рецензента в меру своих возможностей, и включенные новые данные и изменения подробно описаны ниже. 1) Авторы утверждают, что все клетки должны обладать высокой активностью глюконеогенеза, но мне неясно, так ли это на самом деле.Поскольку (низкая) глюкоза используется в качестве источника углерода, кажется возможным (или даже вероятным), что некоторые клетки могут поглощать достаточное количество глюкозы из среды, в то время как другие (например, в более плотных и внутренних областях колонии ) не. Конечно, трудно избежать таких различий в доступности питательных веществ в колонии. Даже на ранних стадиях развития (в условиях низкого содержания глюкозы (0,1%)) большинство клеток проявляют глюконеогенез (рис. 1). Это основано на двух экспериментальных доказательствах. Во-первых, когда мы помещаем репортерный штамм глюконеогенеза ( PCK1 репортер) на чашку с низким содержанием глюкозы (0,1%), в течение нескольких часов после роста колония демонстрирует однородный глюконеогенез. Это говорит о том, что на ранних стадиях развития колонии большинство клеток проявляют глюконеогенез.Это также очевидно из рисунка 6D в рукописи (вы можете видеть равномерную флуоресценцию в колонии репортера глюконеогенеза, отображаемой при более низкой экспозиции (~ 1 сек)) репортера глюконеогенеза. Однако по мере развития колонии активность глюконеогенеза становится гетерогенной, при этом центр колонии проявляет минимальную активность глюконеогенеза (рисунок 1 — приложение к рисунку 2A), темные клетки проявляют максимальную активность глюконеогенеза (рисунок 1 (рукопись), рисунок 6, рисунок 1 — рисунок, приложение 2A), а светлые клетки почти не проявляют активности глюконеогенеза (рисунки 1C и 6D). Во-вторых, мы также включаем дополнительный контроль, используя клетки, выращенные в той же самой (жидкой) среде с низким содержанием глюкозы в течение очень короткого времени (~ 6-8 часов, при этом клетки все еще находятся в логарифмической фазе), и обнаружили, что даже в лунке В смешанной системе (планктонные культуры), в которой питательные вещества равномерно распределяются для клеток, в отличие от колонии, низкий уровень глюкозы (0,1%) сильно запускает глюконеогенез (это мы включили в качестве нового дополнительного рисунка, Рисунок 1 — рисунок в приложении 2B). В этом эксперименте мы отслеживали количество двух глюконеогенных ферментов (Pck1 и Fbp1) и сравнивали количество белка, используя клетки, выращенные в среде с высоким (2%) или низким уровнем глюкозы (0.1%). Низкий уровень глюкозы сильно запускал экспрессию этих ферментов, в то время как при высоком уровне глюкозы эти ферменты почти не определяли экспрессию белка. В исправленную рукопись добавлен соответствующий текст. Наконец, используя нашу модель, мы смоделировали развитие колоний с использованием 3 различных начальных концентраций глюконеогенных клеток A) 95% клеток являются глюконеогенными B) 50% клеток являются глюконеогенными и C) 10% клеток являются глюконеогенными. Мы видим устойчивое развитие структурированной колонии с отчетливыми метаболическими состояниями (напоминающую настоящую колонию дикого типа) только тогда, когда начальный процент глюконеогенных клеток высок (95%).Таким образом, наша модель предполагает, что для развития колоний, демонстрирующих различные метаболические состояния, большинство клеток должны быть глюконеогенными в начале развития колонии. Когда большинство клеток являются глюконеогенными, критический ресурс для появления светлых клеток, трегалоза, достигает пороговых уровней, и это позволяет переключать темные клетки на светлые клетки, что, в свою очередь, приводит к развитию структурированной колонии (ответ автора изображение 2A). Возможно, что пороговые уровни трегалозы не достигаются, когда мы моделируем развитие колонии с меньшим процентом глюконеогенных клеток (50% или 10%), и, следовательно, мы не видим структурированную колонию, которая напоминает колонию дикого типа (изображение ответа автора 2B и C). Черные области представляют собой темные ячейки, а серые области представляют собой светлые ячейки. Однако, в принципе, должно быть возможно получить менее искаженные результаты в среде, не содержащей глюкозы (например,грамм. этанол + глицерин), что заставит все клетки вступить в глюконеогенез, если только некоторые клетки действительно не получат некоторую форму глюкозы (трегалозы), продуцируемой другими клетками. Мы согласны с предположением рецензента о том, что мы могли смотреть на развитие колоний в среде, содержащей этанол + глицерин в качестве единственного источника углерода. Так получилось, что все наши первоначальные наблюдения в этих условиях низкого (а не полного отсутствия) глюкозы мы провели совершенно случайно. Мы начали с этих условий с низким (а не с отсутствием) глюкозы только потому, что это хорошо изученное условие для изучения развития колоний у дрожжей (Granek and Magwene, 2010; Reynolds and Fink, 2001).Впоследствии мы продолжили делать все наши оставшиеся открытия, используя это состояние с низким содержанием глюкозы. Возможно, если бы мы начали наши исследования без глюкозы, мы могли бы сделать другие наборы наблюдений, но используемое условие низкого уровня глюкозы является очень разумной средой для роста для S. cerevisiae и действительно является очень хорошо установленным состоянием (в ряд опубликованных исследований с использованием дрожжей для изучения глюконеогенеза, активации киназы Snf1, развития колоний и т. д.). Учитывая, что мы подкрепили наши утверждения прямыми измерениями метаболитов и метаболического потока (о которых, насколько нам известно, никогда не сообщалось по дрожжевым колониям) и более определенно характеризовали соответствующие метаболические состояния, результаты довольно однозначны.Теперь мы включаем дополнительные данные для дальнейшего сравнения активности PPP (с использованием экспериментов с потоками на основе стабильных изотопов) в светлых и темных ячейках, и теперь они включены в рисунок 2, который устанавливает эти состояния вне всяких сомнений. Тем не менее, сейчас мы начинаем исследовать, что происходит с колониями при выращивании без глюкозы (и с этанолом в качестве единственного источника углерода). Судя по очень предварительным исследованиям, общая сложность этих колоний кажется даже больше, чем при низком уровне глюкозы, и рост и развитие этих колоний происходит в течение значительно более длительных периодов времени (по сравнению с состоянием с низким содержанием глюкозы).В настоящее время мы находимся в процессе определения метаболической схемы этих колоний, выращенных в среде этанол + глицерин. Морфология этих колоний в этих условиях отличается от морфологии колоний при низком уровне глюкозы (0,1%). Пожалуйста, обратитесь к изображению ответа автора 3 для сравнения (и сравните с рисунком 1 в рукописи). Мы полагаем, что повторение всей серии экспериментов с совершенно другим составом среды выйдет за рамки настоящего исследования. 2) Тест, в котором клетки переносят в среду, где действительно важен глюконеогенез (этанол + глицерин), кажется ошибочным, поскольку в этой среде требуется не только глюконеогенез, но и дыхание.Более того, хотя я верю в выводы, сделанные из этого эксперимента, контрольные клетки, выращенные с глюкозой, были предварительно выращены в жидкости, а не на планшете, что не делает их истинным контролем, поскольку клетки, поступающие из чашки, также должны будут адаптироваться к жидкая среда. Вам также не хватает столбцов ошибок на графике 2A (i)? Более того, в подразделе «Клетки организуются в пространственно ограниченные, противоположные метаболические состояния внутри колонии» и на рис. 2А авторы заявляют о разнице в задержке, но, поскольку были измерены только первые 9 часов роста, мне трудно сделать вывод из этого графика. если это действительно только разница в задержке или если клетки, возможно, также показывают различия в скорости роста в течение гораздо более длительного времени (особенно в глюконеогенной среде). Мы согласны с автором в том, что дыхание необходимо для клеток, растущих в среде, содержащей этанол + глицерин в качестве единственного источника углерода. Однако мы не делаем каких-либо серьезных выводов из этого эксперимента. Фактически, мы сделали это только в качестве предварительного эксперимента, чтобы определить существование различных метаболических состояний в одном и том же сообществе (а не для исследования потребности в дыхании). Ключевым выводом этого эксперимента было только то, что темные клетки, которые демонстрируют глюконеогенное состояние, более приспособлены к росту в среде, содержащей этанол + глицерин, по сравнению с светлыми клетками, которые демонстрируют альтернативное метаболическое состояние.Вот и все. Точно так же светлые клетки более приспособлены к росту в среде, содержащей глюкозу, по сравнению с темными клетками. Фактически это то, что побудило нас лучше охарактеризовать световые клетки и побудило нас провести гораздо более решительные эксперименты. Репортеры для высокой активности PPP (рис. 2B) были разоблачительными, предполагая, что эти клетки имели неожиданное состояние высокой активности PPP. Однако в более ранней версии у нас не было прямых метаболических доказательств этого. Поэтому теперь мы включаем новый эксперимент с метаболическим потоком на основе стабильных изотопов, обеспечивающий 13 C глюкозы светлым и темным клеткам в течение ~ 5 минут и непосредственно измеряющий поток в поздние метаболиты PPP (рибозо-5-фосфат и седогептулозу). 7-фосфат).Мы обнаружили, что световые клетки имеют значительно более высокий поток в PPP (по данным этих вновь синтезированных метаболитов). Кроме того, мы также показываем, что светлые клетки синтезируют больше нуклеотидов по сравнению с темными клетками, причем синтез новых нуклеотидов является канонической конечной точкой высокой активности PPP. Мы включаем эти новые данные, непосредственно измеряющие поток PPP, на новый рисунок 2D, а также на рисунок 2 — дополнение к рисунку 1B. Данные репортера PPP остаются на Рисунке 2D, а нуклеотидные данные теперь на Рисунке 2E.Эти данные однозначно демонстрируют, что светлые клетки обладают значительно большей PPP-активностью, чем соседние темные клетки. Мы внесли соответствующие исправления в текст, чтобы прояснить этот момент. Кроме того, хотя я верю в выводы, сделанные из этого эксперимента, контрольные клетки, выращенные на глюкозе, были предварительно выращены в жидкости, а не на чашке, что делает их не настоящим контролем, поскольку клетки, поступающие из чашки, также должны будут адаптироваться к жидкая среда. Мы согласны с рецензентом в том, что клеткам, выходящим из чашки, потребуется время, чтобы адаптироваться к жидкой среде.Однако клетки, выращенные с высоким содержанием глюкозы (хотя и планктонные), служат просто контролем, чтобы показать, что светлые клетки ведут себя как клетки, растущие в условиях, богатых глюкозой. Также см. Ответ на предыдущий пункт (где мы сейчас прямо демонстрируем, что светлые клетки имеют значительно более высокую активность PPP, чем темные клетки) У вас также отсутствуют планки ошибок на графике 2A (i)? Мы благодарим рецензента за указание на это. К этому графику добавлены планки погрешностей, которые представляют стандартное отклонение. Более того, в «Клетки организуются в пространственно ограниченные, противоположные метаболические состояния внутри колонии» и на рис. 2А, авторы заявляют о различии в задержке, но поскольку были измерены только первые 9 часов роста. Мы согласны с рецензентом, и текст был изменен следующим образом: «Ожидается, что темные клетки устойчиво росли и достигли значительно большего количества клеток (0D 600 ) по сравнению со светлыми клетками в глюконеогенном состоянии (рис. 2А). ” 3) Если поглощение трегалозы действительно требуется для легких клеток, то почему делеция MAL11 и NTh2 не отменяет существование светлых клеток и специфическую морфологию колонии (как показано на рисунке 5D)? Как установлено в этой рукописи, одной из отличительных черт светлых ячеек является их высокая активность PPP. Фигура 5B и 5C ясно показывает, что штамм ∆nth2 , который не может эффективно расщеплять и использовать трегалозу, не имеет каких-либо обнаруживаемых легких клеток по сравнению с диким типом.Штамм ∆nth2 , несущий репортерную плазмиду PPP, демонстрирует флуоресценцию no , что позволяет предположить, что способность расщеплять трегалозу имеет решающее значение для появления светлых клеток. По отдельности, штамм ∆mal11 имеет значительно уменьшенные популяции легких клеток по сравнению с диким типом, как видно из рисунков 5B и 5C. Это может быть связано с вкладом др. Транспортеров трегалозы с низким сродством в отсутствие Mal11 / ATG1. Несколько исследований показали, что S.cerevisiae обладают низкоаффинной транспортной активностью трегалозы в отсутствие высокоаффинного переносчика Mal11 / ATG1 (например, Stambuk et al., 1996, Stambuk et al., 1998). S. cerevisiae , как известно, содержит в своем геноме несколько транспортеров α-глюкозида (Chow et al., 1996, Lagunas 1993), и вполне вероятно, что любой из них может способствовать низкоаффинному транспорту трегалозы в клетке . ∆mal11 штамм. Наконец, делеция MAL11 и NTh2 резко снижает появление светлых клеток, которые локализуются на периферии колонии (рис. 5C).Однако общая видимая морфология колонии не изменяется, поскольку морфология «морщинистости» в основном обусловлена темными клетками (глюконеогенными), а не светлыми клетками. Как показано на Фигуре 5D, популяция темных клеток остается неизменной даже после удаления механизма поглощения и утилизации трегалозы. В исправленную рукопись добавлен соответствующий текст. Рецензент № 2: […] У меня два основных комментария. Первый комментарий является научным: мне не стало ясно, почему на фундаментальном уровне клетки дифференцируются на два различных метаболических состояния, вместо того, чтобы все клетки достигли общего промежуточного метаболического состояния.Я думаю, что этот вопрос наиболее четко возникает в Обсуждении, где авторы резюмируют основные идеи. Все клетки изначально находятся в одинаковом состоянии (глюконеогенез). Они производят трегалозу. Трегалоза накапливается извне до тех пор, пока не достигнет концентрации, при которой некоторые клетки переходят в другое состояние (гликолитический / высокий PPP) и начинают потреблять трегалозу. Понятно ли, почему нет другого результата — что все клетки вместе со временем снижают глюконеогенетическую активность и все достигают одного и того же промежуточного метаболического состояния? Мне было бы очень интересно узнать точку зрения автора на этот вопрос. Мы благодарим рецензента за ценный вклад и отзывы, которые помогли улучшить рукопись. Мы учли все опасения рецензента в меру своих возможностей. Мы благодарим рецензента за это конкретное предложение, хотя это не было первоначальной целью нашей рукописи. Здесь мы сосредоточимся только на том, как клетки в двух состояниях могут возникать и организовываться в пространстве. Однако этот запрос побудил нас продолжить изучение преимуществ этих двух состояний, и мы получили поразительные данные в этом отношении.Наши данные демонстрируют, что наличие светлых клеток имеет решающее значение для роста колонии (теперь показано на рисунке 7A). Колонии из клеток, в которых отсутствуют легкие клетки (штамм с делецией nth2 (фермент треалаза)), не могут так эффективно расширяться в пространстве, как колонии дикого типа. Это говорит о том, что светлые клетки важны для пищевого поведения, демонстрируемого колонией, потенциально для расширения в новые районы с лучшим доступом к пище. Ранее мы продемонстрировали, что темные клетки имеют решающее значение для появления светлых клеток, поскольку светлые клетки используют трегалозу, продуцируемую темными клетками, для поддержания своего высокого метаболического состояния PPP (Рисунок 6).Таким образом, возможно, наличие двух различных метаболических состояний является стратегией хеджирования пари, когда клетки с разными метаболическими состояниями (светлые и темные клетки) позволяют колонии эффективно разрастаться и добывать питательные вещества. Не делая преувеличений, мы включаем соответствующий текст вместе с этими новыми данными в исправленную рукопись. Второй комментарий касается текста: я нашел Введение трудным для понимания и не уверен в том, как обсуждаются некоторые концепции.Например, во втором абзаце раздела «Введение» почти каждое предложение содержит утверждение, которое я не понимаю или которое, по моему мнению, не соответствует тому, как термины обычно используются в данной области. Предлагаю авторам еще раз вернуться к Введению. Мы внесли существенные изменения и дополнения в Введение и Обсуждение рукописи. В более раннем представлении мы, возможно, потеряли ясность для краткости. Эта исправленная версия должна быть намного яснее. Мы также приносим свои извинения за любые непреднамеренные ошибки в использовании терминов, поскольку все мы пришли из разных областей.Наша цель состояла в том, чтобы привнести более прямую биохимическую перспективу в эту область, где данные получены из различных экспериментальных подходов. Мы внесли несколько изменений и уточнений в текст во Введении. Обращайтесь к общим ответам за подробностями обо всех внесенных изменениях. Инфинити QX30. Цена: 2 410 000 руб. В продаже: с 2016 года Мерседес-Бенц GLA 250.Цена: 2 692 000 руб. В продаже: с 2017 года Infiniti не скрывает, что QX30 выполнен на шасси Mercedes. И не только потому, что такого родства нечего стыдиться. Японцы перелопатили Mercedes-Benz GLA настолько основательно, что в итоге получили полностью самостоятельную модель, во внешности которой нет даже намека на немецкие корни. Нынешний главный конструктор группы Nissan Альфонсо Альбайса, под руководством которого был создан QX30, оказался настоящим мастером своего дела.«Японец» получился пропорциональнее, ярче и агрессивнее оригинала. Хищный взор суженных светодиодных фар, замысловатые линии панелей кузова — как напряженные мускулы зверя, готовящегося к прыжку. Не зря Альфонсо сравнил образ этой модели с гепардом! Mers »в этом плане проще, да и недавний рестайлинг не сильно повлиял на его внешний вид. Наверное, поэтому дилеры не спешат заменять брошюры, напечатанные в начале прошлого года — неопытный глаз вряд ли заметит разницу, что в основном касается конструкции решетки радиатора и формы бамперов.Но самое удивительное, что вы обнаружите, сравнивая стоящие рядом кроссоверы на соплатформенной платформе, это то, что при тех же размерах Infiniti кажется больше, а его легкосплавные диски больше! На всякий случай проверил габариты шин: и там, и там 235 / 50R18, но черная «заливка» внутренней части колес QX30 визуально увеличивает их радиус. Подобные двухцветные колеса можно заказать для GLA, но по отдельной цене — как и многое из того, что есть у QX30, без дополнительной платы. При более высокой цене комплектация мерса заметно беднее. Здесь нет бесключевого доступа, системы кругового обзора, электроприводов передних сидений, кожаной отделки сидений и приборной панели, потолка из алькантары, панорамной стеклянной крыши, навигации, а вместо роскошной аудиосистемы Bose с отдельным сабвуфером, есть хорошая, но все же не такая богатая по звуку, стандартная Audio 20. Более того, даже такая мелочь, как складной подлокотник с люком в спинке заднего дивана, доступна здесь только за доплату.Но в GLA неожиданно обнаружили электрическую дверь багажного отделения, чего в принципе нет у QX30, а также порадовали 8-дюймовый «планшет» медиацентра — на его фоне 7-дюймовый экран Infiniti с простой графикой и невысоким разрешением смотрится очень бледный. Камеры кругового обзора, дополнительно встроенные в зеркала заднего вида и решетку радиатора, помогают не только при парковке, но и при движении по бездорожью На лобовом стекле GLA крепится системный блок ЭРА-ГЛОНАСС, совмещенный со штатным видеорегистратором из линейки фирменных аксессуаров Mercedes-Benz.Светодиодные фары, которые устанавливались на QX30 с момента его появления, появились на GLA только после фейслифтинга. Кстати, сейчас QX30 в «базе» идет с галогенами — такая машина (с тканевым салоном) стоит от двух миллионов сильно растерялись в интерьере: если бы не фирменные кнопки электропривода сидений на боковинах дверей и рычаг рулевой колонки «все-в-одном», никто бы и не догадался об этом. отношения с Mercedes-Benz.Интерьер QX30 фактически сделан с нуля — различаются даже форма и размер перчаточного ящика. Центральная консоль — у каждого свое. За счет «кочерги» автомата в Мерседесе освободили место для вместительного контейнера, но немецкие конструкторы почему-то спрятали разъемы USB в подлокотнике, что делает замену флешки или подключение зарядки крайне неудобно. шнур на ходу. Сам подлокотник GLA подвижный, и на его максимальной «досягаемости» дотянуться до кнопки открытия ящика проблематично.На этом фоне статичный, разноразмерный (удлиненная водительская часть), дата-подлокотник удобнее, под рукой USB-разъемы. Спинка QX30 имеет магнитный люк для перевозки лыж и других длинномерных предметов Багажник GLA чуть больше по объему. Под полом есть дополнительная ниша для хранения вещей: ни у кроссоверов нет запаски, а у QX30 вместо сабвуфера Но дизайн, эргономика и оснащение — далеко не все, что отличает эти кроссоверы.У них даже трек другой! Расстояние между колесами передней оси у GLA больше, чем у задней, а на QX30 — наоборот, из-за чего радиус поворота последнего почти на полметра меньше. Отличается и вес — Infiniti тяжелее на четыре десятка килограммов, что сказывается на паспортных данных, согласно которым Mercedes-Benz немного быстрее и экономичнее. Но это на бумаге, а на самом деле машины разгоняются лицом к лицу, а бензин расходуется плюс-минус столько же.Зато у GLA больше возможностей для настройки режимов движения — есть не только «спортивный» и «экономичный», как у QX30, но еще «комфортный», «внедорожный» и «индивидуальный», где можно отдельно задать параметры. двигатель, руль, коробка передач и даже системы кондиционирования. Хотя в реальной жизни и двух режимов Инфинити хватает за глаза. INFINITI QX30 2410 000 руб. Вождение автомобиля Едет быстро, рулит легко, но на неровностях подвеска иногда пробивает Салон Пакет высшего класса, включая отделку кожей Nappa и стеклянную крышу Комфорт Все нормально, только спереди «давит» низкий потолок, а сзади тесновато и шумно Безопасность Набор систем безопасности не впечатляет Цена QX30 стал намного доступнее GLA Средний балл «Мускулистый» корпус Инфинити хорош со всех сторон.Двухцветные колеса кажутся больше, чем есть на самом деле Щиток приборов — от базовой версии GLA, без колодцев. Цифровая «резервная копия» спидометра на удивление точна Подлокотник с раскладывающимися подстаканниками Вождение автомобиля Персонаж — как у конкурента, но выбор настроек движения шире Салон Немцы сэкономили на доработке, но уже в «базе» стоит 8-ми дюймовый «планшет» Комфорт Без стеклянной крыши потолок выше.Дверь багажного отделения с электроприводом очень удобна Безопасность Имеется система автоматического торможения Цена За такие деньги ожидаешь лучшее оборудование Средний балл После обновления внешний вид кроссовера изменился на грани нюансов. Для GLA можно выбрать другой клиренс — максимальный, 20 см, ему больше всего подходит Оцифровка аналоговых шкал обновленного приборного щитка стала меньше Медиа-система Audio 20 радует скоростью, графикой и четкостью изображения несенсорного экрана * Транспортный налог в Москве. ТО-1 / ТО-2 — по данным дилера. Каско и ОСАГО — из расчета 1 водитель-мужчина, холост, возраст 30 лет, стаж вождения 10 лет. На Женевском автосалоне 2015 года японцы провели первый публичный показ нового кроссовера Infiniti QX30. Но это был всего лишь предсерийный автомобиль, а его коммерческая модель, мало чем отличавшаяся от концептуального предшественника, дебютировала в ноябре 2015 года одновременно на двух сторонах планеты — на автомобильных выставках в Гуанчжоу и Лос-Анджелесе. Летом 2016 года внедорожник начал осваивать мировую арену, а уже в первые дни осени станет доступен российским покупателям. Действительно, Infiniti QX30 выглядит довольно привлекательно. В его обтекаемых и одновременно стремительных линиях тела можно уловить нотки дерзости и отваги японского самурая, всегда готового броситься навстречу любому испытанию. По габаритам Infiniti QX30 — компактный кроссовер … Его длина составляет 4425 мм, ширина без учета зеркал не превышает 1815 мм, а высота ограничена 1515 мм. Между колесными парами автомобиля остается зазор 2700 мм, а его дорожный просвет достигает вполне солидных 202 мм. Внутри он выглядит даже оригинальнее своего внешнего вида. Интерьер кроссовера оформлен: дерзко, футуристично и не менее дерзко, чем экстерьер. И передняя панель, и дверные панели, и даже сиденья практически лишены прямых углов и линий, вместе демонстрируя тонкости кожаных, пластиковых и металлических деталей, которые создают образ передового салона молодежного автомобиля, поскольку целевая аудитория » Японские «молодые» автомобилисты (до 40 лет). Продуманные передние сиденья не вызывают вопросов — у них профиль с ярко выраженными боковинами и упаковка оптимальной жесткости, а также достаточные диапазоны регулировки. Во втором ряду сядут двое взрослых со всеми удобствами, а вот третий точно будет лишним. Багажное отделение Infiniti QX30 вместительное — его объем в «походном» виде составляет 430 литров. Правильно настроенный отсек отделан приятными материалами и оборудован розеткой на 12 вольт, а в подполье в нем прячется док или ремкомплект.«Галерея» умещается в совершенно ровный пол на две части, значительно увеличивая объем места для багажа. Технические характеристики. Для российского рынка QX30 комплектуется только одним бензиновым двигателем — под капотом внедорожника находится четырехцилиндровый 2,0-литровый двигатель «Мерседес» с непосредственным впрыском, цепным приводом ГРМ с 16 клапанами, турбонаддувом и механизмом регулировки фаз газораспределения. . Он генерирует максимум 211 «жеребцов» при 5500 об / мин и 350 Нм доступного крутящего момента при 1200–4000 об / мин.Силовая установка сочетается с 7-ступенчатым преселективным «роботом» с двумя «мокрыми» сцеплениями и интеллектуальной полноприводной трансмиссией в комплекте с электрогидравлической муфтой, которая способна распределять тягу между осями до соотношения 50:50. Асфальтовая дисциплина для пятидверки не проблема: максимальная скорость 230 км / ч, а «выстрелов» до первой «сотни» требуется 7,3 секунды. В режиме город / трасса расходует не более 6,7 л на 100 км пробега. Компактный кроссовер Infiniti QX30 построен на безе модульной платформы MFA с независимым расположением ходовой части на двух осях — стойках McPherson спереди и многорычажной подвеске сзади. Доля высокопрочных и сверхвысокопрочных марок стали в конструкции кузова достигает 73%. Все колеса автомобиля оснащены дисковыми тормозами с ABS, EBD, Brake Assist и другой электроникой. Опции и цены. На российском рынке для Infiniti QX30 подготовлено три варианта оснащения — GT, GT Premium и Cafe Teak. Что общего у «Жигулей» и «Гранта»? Сегмент рынка и не более того. Этот пример досадно крутился у меня в голове как при встрече на автосалоне в Лос-Анджелесе, так и во время тест-драйва, который состоялся двумя месяцами позже. Сохранив индекс, компактный кроссовер со сменой поколения полностью преобразился. Абсолютно. Радикально. Создатели автомобиля оставили старые наружные зеркала заднего вида явно не из соображений экономии — а как «пасхальное яйцо». Немногие так перерисовывались, как «пятьдесят». Вместо заднеприводной платформы — передний привод, вместо продольного двигателя — поперечный, вместо классического автомата — вариатор, вместо атмосферников — революционный турбомотор. Начну с него. Двигатели с регулируемой степенью сжатия уже несколько десятилетий эксплуатируются по всему миру. Но с серийным воплощением первой поторопилась марка Infiniti.Двухлитровая «четверка» VC-Turbo плавно меняет степень сжатия с 8,0 для максимальной мощности до 14,0 — для минимального расхода топлива. В последнем случае двигатель работает по экономичному циклу Аткинсона. Реальную экономию еще предстоит оценить, и мы обязательно займемся этим чуть позже. А в окрестностях Лос-Анджелеса местность слишком разнообразна, чтобы говорить об аппетитах машины. А вот к мощному ускорению претензий нет. Особенно на фоне разгоняемого 222-сильным мотором 2.5 на сотню за неприличное в премиальном сегменте 9,5 сек. 2,0 VC-T 2,5 3,7 Тип P4 с турбонаддувом V6 атмосферный V6 атмосферный Мощность 272 ч.п. при 5600 об / мин 222 л.с. при 6400 об / мин 330 л.с. при 7000 об / мин Крутящий момент 380 Нм при 4400 об / мин 253 Нм при 4800 об / мин 362 Нм при 5200 об / мин Степень сжатия 8,0–14,0 10,3 11,0 В штатном режиме управляющей электроники турбомотор становится немного бодрее после 3500 об / мин, но до этого предела прирост скорости нельзя назвать вялым.Переход в спортивный режим сопровождается более активным движением стрелки тахометра, более громким звуком двигателя и чуть более тяжелым рулевым колесом — но это чистые декорации, реального эффекта за ними нет. Наигравшись с переключателем (есть еще режим «эко», в котором QX50 становится «овощем»), я забыл о нем до конца поездки. У альянса Renault-Nissan нет автоматической коробки передач для мощного поперечного двигателя.Пришлось довольствоваться вариатором, который не слишком подходил для автомобиля премиум-класса. Агрегат полностью модернизирован с восемью виртуальными передачами. И он мне понравился! Он живо думает, так что нет необходимости щелкать подрулевыми переключателями. «Адаптивный» движок тоже вносит весомый вклад — у них полное взаимопонимание. И японцы заверили меня, что знают о претензиях к вариаторам предыдущих поколений и что все проблемы решены. Усилие рулевого управления синтетическое.Иначе и быть не могло, ведь тестовые автомобили оснащены системой рулевого управления DAS 2.0, без механической связи рулевого колеса с колесами. А зачем было ограждать сад, если не ощущаются преимущества перед классической конструкцией? Хорошо, что DAS 2.0 будет предлагаться за доплату и только для машин в самой дорогой комплектации. То, как QX50 справляется с поворотами, приятно удивило. Крены минимальны, автомобиль легко следует за рулем, и даже стандартные, никогда не спортивные шины, сохраняют заводной характер.QX50 обязательно порадует любителей активной езды. Сиденья у него все равно были бы лучше: при отсутствии боковой поддержки скользкая кожа — не лучшее решение. Еще один комплимент адресуемому шасси. К моему удивлению, спущенные шины 255/45 R20 не превратили машину в трясину. Дороги в Калифорнии местами несовершенные, но — без проблем: жесткие стыки эстакад, мелкие ямы и трещины, подвеска работает отлично. О больших колесах не пожалел. Причем основная часть машин будет продаваться в более простых вариантах, с 19-дюймовыми шинами и даже без усиленных боковин (типа безбилетного пассажира), которые будут мягче. Кстати, адаптации подвески для России может не быть. Дорожный просвет QX50 даже в американской спецификации составляет 218 мм (у предшественника были недостойные 165 мм). Infiniti QX50 едет неплохо, но ощущение премиальности местами полностью отсутствует. Первая и основная претензия — к мультимедийной системе … Оставим в стороне странное решение с двумя ЖК-дисплеями по центру, из которых верхний нужен только для отображения карты навигации и снимков с камер.По графике и производительности комплекс безнадежно отстает от конкурентов. И пользоваться им неудобно. Надеюсь, Infiniti понимает, на чем им нужно сосредоточить свои усилия в ближайшем будущем. Пластик в салоне чрезвычайно прочный, но он используется в местах, куда обычно не прикасаются руки человека. Все остальное обтянуто кожей и замшей. Смотрится красиво, хотя швы местами сбиваются. В 2019 году на рынок должен выйти новый Infiniti QX70 и мы предлагаем оценить, каким будет экстерьер и интерьер новинки на основе первого фото модели, а также узнать, какие технические характеристики, инновационные опции и расширенные возможности получит роскошный кроссовер. Infiniti является дочерней компанией Nissan и специализируется на производстве легковых автомобилей премиум-класса. QX70 — пятиместный кроссовер среднего размера премиум-класса, который впервые был показан в 2002 году. С 2013 года выпускается второе поколение автомобиля. Основными преимуществами, обеспечивающими интерес к автомобилю, являются: Подготовленная Infiniti новая версия QX70 2019 модельного года изначально указывала на шпионские фотографии обновленной версии кроссовера, появившиеся в начале года в ряде автомобильных изданий.Позже компания подтвердила информацию о разработке очередной модификации люксового автомобиля. Измененное внешнее изображение Infiniti QX70 2019 года хорошо видно на представленных фотографиях предсерийной версии новой модели кроссовера. Дизайн обновленной версии существенно отличается от автомобиля второго поколения. Существенных изменений в передней части дизайнеры компании добились с помощью: Заднюю часть автомобиля образуют: Интерьер нового Infiniti QX70 2019 года полностью соответствует требованиям премиального автомобиля и отличается высочайшим комфортом, роскошью и архитектурой.Особенно необычно смотрится центральная консоль, дизайн которой выполнен в виде набегающих друг на друга волн. При этом на самом верху находится цифровая приборная панель и цветной монитор многофункционального комплекса, защищенный одним длинным антибликовым козырьком. На следующем ярусе — диффузоры для оборудования климат-контроля, а в нижней зоне — перчаточный ящик. Дополнительно следует выделить интерьер Дизайн задних сидений был изменен, чтобы сделать салон более просторным. Кроме того, у них есть возможность отдельно регулировать спинку. Также кресла можно сложить в соотношении 60/40, образуя ровный пол, что не только увеличивает размер багажного отделения, но и облегчает погрузку (разгрузку). В дизайне нового Infiniti QX70 2019 года использованы роскошные материалы: кожа Размеры кроссовера составляют: Для оснащения кроссовера силовыми агрегатами предусмотрены следующие моторы: Для полноприводной трансмиссии рассчитан 7-ступенчатый среднечастотный автомат. Среди разнообразного современного оснащения кроссовера следует выделить: Окончательный список всего доступного оборудования будет известен до начала сбора заявок на кроссоверы. Ожидается, что новый Infiniti в своем классе составит конкуренцию таким популярным моделям: У российских дилеров новая модель Infiniti QX 70 появится в начале 2019 года.По предварительным данным производителя, для отечественных покупателей новинка сохранит существующие обозначения вариантов комплектации. Начальная цена под названием Premium составит 3 миллиона 650 тысяч рублей. В преддверии официальной премьеры нового Infiniti QX70 2019 года предлагаем обзор предыдущего поколения элитного кроссовера: Infiniti Q30 — результат сотрудничества японской и немецкой автомобильной промышленности. Что еще может быть лучше? В статье представлены технические характеристики, фото, видео и комплектация Infiniti Ku30. Действительно, полный привод, клиренс 178 мм, и надо сказать, что Infiniti Ku30 во всем превосходит свою соплатформенную GLA.Немец по сравнению с японцем проигрывает по всем параметрам, от дизайна до мультимедиа. Более того, в стране восходящего солнца решили, что не стоит ограничиваться одними МБ, надо собрать силовые агрегаты со всего мира. Так, например, здесь в модельном ряду можно найти 109-сильный двигатель Renault, но для России он недоступен. Капот — это утопленный, изогнутые огромные колесные арки, заполненные колесами от 17 до 19 дюймов по спецификации.Кстати, в соплатформе можно найти даже 16 дюймов. Особого внимания заслуживает оптика. По задумке производителя это глаз, надо сказать очень похожий. Здесь спрятана светодиодная матрица, которая умеет заглядывать в поворот. Корм здесь, конечно, ни на что не похож. Хэтчбек полностью добил всех своих конкурентов. В нем столько экспрессии в сочетании с изяществом и элегантностью. Отсюда Infiniti Q30 выглядит убитым, мускулистым, подтянутым. Широкая колея плавно переходит в узкую крышу, а продолжение волнообразных форм видно здесь в фонарях и краю номерного знака.Сразу хочется отметить грубую ошибку дизайнеров, да и бренда в целом. Глянцевый черный пластик, конечно, красив, он полностью подчеркивает огромные хромированные патрубки выхлопной системы, но это очень непрактично, особенно для нашей страны. Панель приборов отличается от большинства вертикальным нулевым положением стрелок и светится как новогодняя елка.Не то что Рено, здесь указатель температуры уже в базовой комплектации. В центре установлен небольшой дисплей, показывающий показания многих систем, например бортового компьютера, систем контроля полосы движения, распознавания дорожных знаков, предотвращения лобового столкновения, показывает расстояние до впереди идущей машины и многое другое. Нужны они или нет — каждый решает сам. Итак, первый силовой агрегат, который предлагается в России (а у нас линейка двигателей снова сильно урезана) — это бензиновый двигатель мощностью 149 лошадиных сил.Кстати, в Европе он заявлен как 156-сильный, ну да ладно. Это бензиновая турбо четверка, которая ездит исключительно на породистом корме АИ-98. Стадо развивает 250 Нм крутящего момента. Этого, надо сказать, достаточно, чтобы почувствовать плавный, но достаточно быстрый разгон до сотни за 9,2 секунды. Максимальная скорость остановилась на отметке 210 км / ч. В городе такой двигатель будет потреблять 7,7 л бензина, по трассе уйдет не более 6 л. Такой мотор работает в паре с неоспоримой 7-ступенчатой роботизированной коробкой передач с двумя мокрыми сцеплениями.Одно сцепление здесь обслуживает четные передачи, а второе — нечетные. Двигатель 1.6 комплектуется только передним приводом. Второй двигатель для российского рынка — двухлитровая турбо четверка, тоже на бензине. Есть уже 211 лошадей, 350 Нм крутящего момента и 7,3 секунды до сотни. Если оценить массу автомобиля в полторы тонны, то это очень хорошо. Максимальная скорость была 230 км / ч, да и двигатель не сильно прожорливал. В смешанном цикле ему потребуется не более 6,9 литров бензина. Burkholderia pseudomallei — бактериальный патоген, вызывающий мелиоидоз, инфекционное заболевание в тропиках с высокой заболеваемостью и смертностью.Он обладает уникальным свойством среди бактерий: сливать инфицированные клетки-хозяева. Мы обнаружили, что наша иммунная система определяет слияние клеток-хозяев, вызванное бактериями или химическими веществами, как сигнал опасности. Аномальное слияние клеток приводит к нестабильности генома и образованию микроядер. Это заставляет хозяина активировать сигнальный путь, ведущий к форме гибели клеток, известной как аутофагическая смерть, которая, вероятно, служит для ограничения аномальной клеточной трансформации. Burkholderia pseudomallei — возбудитель мелиоидоза, инфекционного заболевания в тропиках и субтропиках с высокой заболеваемостью и смертностью.Факультативная внутриклеточная бактерия индуцирует слияние клеток-хозяев через свою систему секреции 5 типа VI (T6SS5), что является важной частью ее патогенеза у млекопитающих-хозяев. Это позволяет ему распространяться межклеточно, не сталкиваясь с внеклеточной защитой хозяина. Мы сообщаем, что бактериальное T6SS5-зависимое слияние клеток запускает экспрессию гена IFN типа I в организме хозяина и приводит к активации пути cGAMP-синтазы – стимулятора генов IFN (cGAS – STING) независимо от бактериальных лигандов. Аберрантные и прерванные митотические события приводят к образованию микроядер, колокализующихся с cGAS, который активируется двухцепочечной ДНК.Неожиданно активация cGAS-STING приводит к транскрипции IFN типа I, но не к его продукции. Вместо этого активация cGAS и STING приводит к гибели аутофагических клеток. Мы также наблюдали экспрессию гена IFN I типа, образование микроядер и гибель химически индуцированных слияний клеток. Следовательно, мы предполагаем, что путь cGAS-STING воспринимает неестественное слияние клеток через образование микроядер как сигнал опасности и, следовательно, ограничивает аберрантное деление клеток и потенциальную клеточную трансформацию посредством индукции аутофагической гибели. Мелиоидоз — инфекционное заболевание, эндемичное для Юго-Восточной Азии, Северной Австралии и все чаще регистрируемое в других тропических частях мира (1, 2). Клинический спектр заболевания может варьироваться от локализованных поражений кожи до тяжелого сепсиса и смерти (1). Возбудителем является Burkholderia pseudomallei , грамотрицательная факультативная внутриклеточная бактерия, способная выживать в различных эукариотических клетках-хозяевах (3-5). Одним из очень необычных фенотипических признаков его внутриклеточного жизненного цикла является образование многоядерных гигантских клеток (MNGC) во многих различных типах клеток в результате слияния инфицированной клетки с соседними клетками (4, 6).После поглощения клетками-хозяевами бактерия выходит из эндосомных пузырьков с помощью одной из своих систем секреции типа III (T3SS3) в цитозоль (7). Через двухкомпонентную сенсорно-регуляторную систему VirAG он обнаруживает восстановленный глутатион в цитозоле, чтобы включить экспрессию T6SS5 (8). T6SS5 участвует в индукции клеточно-клеточного слияния, приводящего к образованию MNGC (9-12), и является критическим фактором вирулентности для патогенеза Burkholderia у млекопитающих-хозяев (9). Помимо T6SS5, внутриклеточная подвижность также способствует образованию MNGC (10). B. pseudomallei полагается на систему подвижности жгутиков fla2 и белок BimA для внутриклеточной подвижности в цитоплазме (13⇓ – 15). Белок BimA, расположенный на хвосте бактерии, позволяет B. pseudomallei использовать актин хозяина путем полимеризации мономерного актина и продвижения бактерии через клетку (13⇓ – 15). Считается, что индукция MNGC способствует локальному распространению бактерии и уклонению от защиты хозяина или противомикробных препаратов (6).Слияние клеток потенциально вовлечено в патогенез мелиоидоза, так как MNGCs наблюдались в образцах тканей пациентов с мелиоидозом и в модели хронических мышей C57BL / 6 с инфекцией B. pseudomallei (16, 17). T6SS — это специализированная молекулярная машина для грамотрицательных бактерий, предназначенная для экспорта и доставки эффекторов через бактериальные мембраны к хозяину. Он состоит из 13 основных компонентов, которые собираются, чтобы сформировать сократительную структуру, напоминающую хвост бактериофага, закрепленную на бактериальной оболочке трансмембранным комплексом (18–20).Хвост T6SS эволюционно, структурно и функционально связан с хвостом сократительных бактериофагов, который состоит из внутренней трубки, окруженной сократительной оболочкой (21–23). Внутренняя трубка T6SS состоит из гексамеров Hcp, уложенных друг к другу головой к хвосту с тримером VgrG на конце (21–23), и сокращение оболочки TssBC продвигает внутреннюю трубку Hcp к целевой клетке для доставки эффекторов (24⇓ – 26). ClpV — это цитозольный белок ААА + АТФаза, который функционирует для повышения эффективности T6SS за счет рециркуляции субъединиц TssBC после сокращения оболочки (27).Эффекторы T6SS выполняют разнообразные функции. В Burkholderia T6SS5 эффектор VgrG5 имеет развитый С-концевой домен удлинения, который отвечает за слияние клеток, хотя точный механизм того, как он запускает слияние клеток-хозяев, неизвестен (11, 12). Первоначально мы исследовали, существуют ли дополнительные фенотипы, придаваемые T6SS5 инфицированным клеткам, помимо слияния клеток. Используя модели клеточной инфекции in vitro с участием различных T6SS5 и мутантов, дефектных по слиянию клеток, мы с удивлением обнаружили, что индуцированное бактериями слияние клеток, а не эффекторы, секретируемые T6SS, запускает врожденный иммунный ответ.Рецепторы распознавания образов хозяина (PRR) обнаруживают связанные с опасностями молекулярные паттерны, которые возникают из хозяина, и связанные с патогенами молекулярные паттерны, присутствующие на микробах. cGAMP-синтаза (cGAS) представляет собой PRR, который, как известно, распознает цитозольную двухцепочечную ДНК и катализирует образование 2’3′-cGAMP, циклического динуклеотида (CDN). CDN связываются со стимулятором адаптера генов IFN (STING), присутствующим в эндоплазматическом ретикулуме, что приводит к индукции гена IFN типа I. cGAS чаще всего участвует в распознавании собственной ДНК опухолевых клеток (28, 29) и ДНК патогенов, таких как вирусы (30–32) или цитозольные бактерии (33, 34).Интересно то, что мы обнаружили, что слияние бактериальных и химических клеток вызывает нестабильность генома, что приводит к образованию микроядер и активации cGAS и STING. Этот процесс приводит к гибели аутофагических клеток вместо выработки IFN типа I. Таким образом, наше исследование раскрывает механизм того, как слияние клетки-клетки действует как опасный сигнал для хозяина, запускающий путь cGAS-STING и гибель клеток, потенциально ограничивая клеточную трансформацию. Для выявления фенотипов, зависящих от T6SS5 во время инфекции, мы использовали различные мутанты B. pseudomallei T6SS5, включая ∆clpV5 , ∆hcp5 и T6SS5 двухкомпонентный мутант-регулятор сенсора ∆virAG . инфекция в макрофагах RAW264.7. Клетки, инфицированные B. pseudomallei , имели экспрессию IFN-β ( IFNB1 ) на уровнях, примерно в 10 раз превышающих уровни, инфицированные мутантом T6SS5, через 16 ч после заражения (рис. 1 A ). Burkholderia thailandensis — близкородственный вид с гомологичным T6SS5 и аналогичным внутриклеточным жизненным циклом — аналогичным образом приводил к 10-кратной большей индукции экспрессии гена IFNB1 по сравнению с мутантами T6SS5 ∆clpV5- и ∆vgrG5 клетки как при низкой, так и при высокой множественности инфекции (MOI) через 11-15 часов, но не через 4-8 часов после инфицирования (рис.1 В ). Внутриклеточные бактериальные нагрузки были сопоставимы между клетками, инфицированными B. thailandensis и мутантами T6SS5, что указывает на то, что более низкая экспрессия IFNB1 не была вызвана дифференциальной бактериальной нагрузкой ( SI Приложение , рис. S1 A ). Поскольку B. pseudomallei представляет собой агент группы риска 3, требующий строгой локализации, B. thailandensis использовался в последующих экспериментах для дальнейших механистических исследований. Burkholderia , дефектная по T6SS5 или внутриклеточной подвижности, индуцирует значительно более низкую экспрессию гена IFN I типа. ( A и B ) Экспрессия IFN-β ( IFNB1 ) в макрофагах RAW264.7, инфицированных Burkholderia , по сравнению с различными мутантами T6SS5. ( A ) Макрофаги RAW264.7 были инфицированы штаммами B. pseudomallei при MOI 1 в течение 16 часов. Анализ был выполнен в трех повторностях, и значения выражены как среднее ± стандартное отклонение.( B ) Макрофаги RAW264.7 были инфицированы штаммами B. thailandensis при MOI 10 в течение 8 и 15 часов или MOI 100 в течение 4 и 11 часов. Анализ был выполнен в двух экземплярах, и значения выражены как среднее ± стандартное отклонение. * P ≤ 0,05; ** P ≤ 0,01; *** P ≤ 0,001; n.s., не имеет значения. ( C ) Световые микрофотографии окрашенных по Гимзе макрофагов RAW264.7, инфицированных различными штаммами B. thailandensis . Клетки инфицировали при MOI 10 или 100 и фиксировали для окрашивания и визуализации образования MNGC при 10-кратном увеличении объектива через 15 или 11 часов после заражения соответственно.(Масштабные полосы, 100 мкм.) Примечание: ∆vgrG5 (a) — инсерционный мутант, а ∆vgrG5 (b) — делеционный мутант в рамке считывания. Дифференциальная экспрессия IFNB1 в поздние моменты времени (от 11 до 15 часов после инфицирования), когда происходило образование MNGC (рис. 1 C ), предполагает, что индукция экспрессии гена IFN типа I может зависеть от события клеточного слияние клеток. Количественная оценка MNGC приведена в Приложении SI , Таблица S1.Чтобы изучить эту возможность, мы использовали двойной мутант ∆bimA∆motA2 , который проявляет фенотип замедленного слияния клеток (10). BimA влияет на полимеризацию актина, а MotA2 влияет на внутриклеточную подвижность, оба из которых не являются частью T6SS5 и, следовательно, не должны иметь дефектную функцию T6SS5. Заражение мутантом ∆bimA∆motA2 при MOI 10 в течение 12 часов в макрофагах RAW264.7 не индуцировало образование MNGC и не увеличивало экспрессию гена IFNB1 , тогда как бактериальная инфекция дикого типа формировала MNGC и активировала IFNB1 ( SI Приложение , рис.S1 B и C ). И это несмотря на то, что у двух из них была сопоставимая бактериальная нагрузка ( SI, приложение , рис. S1 D ). В этих условиях ∆bimA∆motA2 экспрессировал гены T6SS5 hcp5 , vgrG5 и virA на уровнях выше B. thailandensis (приложение SI , рис. S1 E E ). В совокупности они представляют возможность того, что слияние клеток может запускать экспрессию гена IFN типа I. Некоторые VgrGs, которые формируют верхушку аппарата T6SS5, считаются «развитыми» и имеют расширенный карбоксиконцевой домен (CTD), который обеспечивает эффекторные функции. CTD Burkholderia VgrG5, как было показано, обладает фузогенной активностью, ответственной за слияние клеток с клетками и образование MNGC, и отделен от роли VgrG в секреции T6SS (12). Как и ожидалось, в RAW264.7 клеток, инфицированных vgrG5-∆CTD , MNGC не образовывались (фиг. 2 A и SI, приложение , таблица S1). Дефектный по слиянию мутант vgrG5-∆CTD также показал соответственно пониженную экспрессию гена IFNB1 по сравнению с клетками, инфицированными B. thailandensis (рис. 2 B ), что позволяет предположить, что слияние клеток с клетками индуцирует повышающую регуляцию экспрессия гена IFN типа I. Однако неясно, обнаруживает ли мутант vgrG5 — ∆CTD дефектное связывание эффекторов на кончике VgrG, поскольку VgrG может действовать как специфические адаптеры для доставки эффекторов (36, 37).Таким образом, когда мы инфицировали редко засеянные клетки бактериями дикого типа так, чтобы они не сливались (рис. 2 C ), экспрессия гена IFN типа I не индуцировалась, даже несмотря на то, что T6SS5 был активирован (рис. 2 D ). и E ). Это исключает роль любых потенциальных бактериальных эффекторов, связанных с CTD VgrG5, в индукции гена IFNB1 . Бактериальное слияние клеток индуцирует экспрессию гена IFN I типа независимо от бактериальных лигандов. ( A ) Световые микрофотографии окрашенного по Гимзе RAW264.7 макрофагов, инфицированных B. thailandensis дикого типа, и дефектных по слиянию клеток vgrG5-∆CTD . Клетки, инфицированные ∆clpV5 , были включены в качестве контроля. Клетки инфицировали при MOI 10 и фиксировали для окрашивания и визуализации образования MNGC при 10-кратном увеличении объектива через 15 ч после заражения. (Масштабные полосы, 100 мкм.) ( B ) Экспрессия IFNB1 в макрофагах RAW264.7, инфицированных различными штаммами B. thailandensis , включая дисфункциональный слияние vgrG5-∆CTD .Макрофаги RAW264.7 были инфицированы при MOI 10 в течение 15 часов. Анализ был выполнен в трех повторностях, и значения выражены как среднее ± стандартное отклонение. ( C ) Световые микрофотографии редко засеянных макрофагов RAW264.7, инфицированных B. thailandensis дикого типа и дефектных по слиянию клеток vgrG5-∆CTD . Клетки инфицировали при MOI 10 и фиксировали для окрашивания по Гимзе и визуализации образования MNGC при 10-кратном увеличении объектива через 15 ч после инфицирования. (Масштабные линейки, 100 мкм.) ( D ) Экспрессия IFNB1 в редко засеянных макрофагах RAW264.7, инфицированных B. thailandensis и vgrG5-∆CTD . Макрофаги RAW264.7 были инфицированы при MOI 10 в течение 15 часов. Уровни транскрипта IFNB1 измеряли с помощью qRT-PCR и нормализовали для неинфицированных клеток. GAPDH Ген использовали в качестве контроля гена домашнего хозяйства. Анализ был выполнен в трех повторностях, и значения выражены как среднее ± стандартное отклонение. ( E ) Экспрессия бактериального гена T6SS5 hcp5 в редко засеянном RAW264.7 клеток инфицированы B. thailandensis . Уровни транскрипта hcp5 измеряли с помощью qRT-PCR и нормализовали до уровня через 2 часа после инфицирования. Анализ проводили в трех экземплярах, и значения выражали как среднее ± стандартное отклонение. ( F ) Световые микрофотографии окрашенных по Гимзе клеток HepG2, обработанных PEG-6000. Клетки HepG2 обрабатывали PEG-6000 и оставляли на 21 час для слияния клеток. Клетки, обработанные D-PBS, были включены в качестве контроля. Клетки окрашивали и визуализировали при 10-кратном увеличении объектива.(Масштабная шкала, 100 мкм.) ( G ) Экспрессия IFNB1 в клетках, обработанных PEG-6000. Клетки HepG2 обрабатывали ПЭГ-6000 и позволяли слиться в течение 21 часа. Транскрипты собирали и анализировали с помощью qRT-PCR. Уровни экспрессии генов были нормализованы для контрольных клеток, обработанных D-PBS. Анализ проводили в трех экземплярах, и значения выражали как среднее ± стандартное отклонение. * P ≤ 0,05; ** P ≤ 0,01; *** P ≤ 0,001; n.s., не имеет значения. Чтобы еще раз подтвердить, что слияние клеток стимулирует экспрессию гена IFN типа I независимо от бактериальных лигандов, мы заменили бактериальную инфекцию полиэтиленгликолем (PEG), чтобы вызвать слияние клеток, чтобы не было помех со стороны бактериальных нуклеиновых кислот.Мы обнаружили, что слияние клеток, индуцированное PEG-6000, коррелировало с повышенной экспрессией гена IFN типа I как в эпителиальных клетках печени HepG2 (рис. 2 F и G и SI, приложение , таблица S1), так и в первичных мезенхимальных стволовых клетках человека. (hMSCs) ( SI Приложение , рис. S1 F и G и таблица S1). Эти данные подтверждают мнение о том, что слияние клеток является движущей силой экспрессии гена IFN I типа. Индукция экспрессии гена IFN типа I может быть вызвана активацией PRR, включая Toll-подобные рецепторы и другие цитозольные рецепторы, чувствительные к нуклеиновым кислотам (38). Поскольку экспрессия T6SS5 и образование MNGC происходит после выхода бактерий из эндосомы в цитозоль (8), цитозольные PRR могут участвовать в повышающей регуляции экспрессии гена IFN типа I во время клеточно-клеточного слияния. STING воспринимает циклические динуклеотиды и, как сообщается, участвует в индукции IFN типа I посредством восприятия событий нарушения мембраны, таких как слияние вирусных клеток (39, 40).Нокаутные по STING макрофаги RAW, инфицированные бактериями дикого типа, не проявляли повышающей регуляции экспрессии гена IFNB1 по сравнению с инфицированными макрофагами дикого типа, хотя межклеточное слияние было обширным (рис. 3 A и B ). Поскольку STING также функционирует как адаптер для сенсоров цитозольной ДНК, мы оценили участие независимого от последовательности сенсора цитозольной ДНК cGAS, который функционирует выше STING. Инфекция B. thailandensis в макрофагах и соответствующих им клетках с нокаутом cGAS привела к обширному образованию MNGC, тогда как инфекция ∆clpV5 привела к меньшему образованию MNGC, а ∆vgrG5 был полностью дефектным в межклеточном слиянии (рис.3 С ). Значительная повышающая регуляция экспрессии гена IFNB1 наблюдалась только в B. thailandensis инфицированных клетках дикого типа, но не в B. thailandensis инфицированных cGAS клетках (фиг. 3 D ). cGAS и STING необходимы для индукции слияния клеток экспрессии гена IFN типа I. ( A ) Световые микрофотографии окрашенных по Гимзе RAW-Lucia-ISG дикого типа и нокаутных по STING клеток, инфицированных различными штаммами B. thailandensis .Клетки инфицировали при MOI 10 и фиксировали для окрашивания и визуализации образования MNGC при 10-кратном увеличении объектива через 15 ч после инфицирования. (Масштаб, 100 мкм.) ( B ) Экспрессия IFNB1 в RAW-Lucia-ISG дикого типа и нокаутированных по STING клетках, инфицированных B. thailandensis и различными мутантами T6SS5. Клетки инфицировали штаммами B. thailandensis при MOI 10 в течение 15 часов. Анализ проводили в трех экземплярах, и значения выражали как среднее ± стандартное отклонение.( C ) Световые микрофотографии окрашенных по Гимзе RAW-Lucia-ISG дикого типа и клеток с нокаутом cGAS, инфицированных различными штаммами B. thailandensis . Клетки инфицировали при MOI 10 и фиксировали для окрашивания и визуализации образования MNGC при 10-кратном увеличении объектива через 15 ч после инфицирования. (Масштабная шкала, 100 мкм.) ( D ) Экспрессия IFNB1 в RAW-Lucia-ISG дикого типа и клетках с нокаутом cGAS, инфицированных B. thailandensis и различными мутантами T6SS5.Клетки инфицировали штаммами B. thailandensis при MOI 10 в течение 15 часов. Анализ проводили в трех экземплярах, и значения выражали как среднее ± стандартное отклонение. Примечание: ∆vgrG5 (a) — инсерционный мутант, а ∆vgrG5 (b) — делеционный мутант в рамке считывания. * P ≤ 0,05; ** P ≤ 0,01; *** P ≤ 0,001; n.s., не имеет значения. Мы также использовали модель инфекции эпителиальных клеток предстательной железы TRAMP C2 с соответствующими нокаутными клетками STING, чтобы определить участие STING.Инфекция B. thailandensis в клетках дикого типа и клетках с нокаутом по STING привела к образованию MNGC, но не к T6SS5 ∆vgrG5 -инфицированным клеткам ( SI Приложение , фиг. S2, A и таблица S1). ∆clpV5 инфицированные мутантом клетки дикого типа и клетки с нокаутом STING также образовывали MNGC, но в меньшей степени по сравнению с клетками, инфицированными B. thailandensis ( SI Приложение , фиг. S2 A и таблица S1). Это ожидается, поскольку известно, что ClpV несущественен для начальной сборки и функции T6SS, но необходим для разборки и рециклинга субъединиц оболочки T6SS после сокращения, тем самым демонстрируя промежуточный фенотип (24, 27, 41).Степень клеточно-клеточного слияния соответствовала усилению экспрессии гена IFNB1 в инфицированных TRAMP C2 клетках дикого типа ( SI, приложение , рис. S2 B ). B. thailandensis- инфицированные клетки с нокаутом STING не имели значительной повышающей регуляции экспрессии гена IFNB1 , несмотря на формирование MNGC ( SI, приложение , фиг. S2). Таким образом, cGAS и STING стимулируются после образования MNGC и необходимы для зависимой от клеточно-клеточного слияния экспрессии гена IFNB1 . Чтобы лучше понять факторы, которые способствуют активации cGAS при слиянии клеток, мы использовали покадровую микроскопию для визуализации слияния клеток во время инфицирования B. thailandensis клеток HepG2. Мы выбрали клетки HepG2, поскольку их больший размер облегчает визуализацию. Степень межклеточного слияния в инфицированных клетках HepG2 соответствовала повышающей регуляции экспрессии гена IFNB1 ( SI Приложение , рис.S3 A и B и Таблица S1). Бактерии имели хромосомную вставку гена mApple, кодирующего красную флуоресценцию, тогда как периферия и ядра клеток были маркированы CellMask и Hoechst 33342 соответственно. Через 14 часов после инфицирования мы наблюдали огромный MNGC, содержащий высококонденсированный генетический материал, некоторые из которых напоминали митотические хромосомы (рис. 4 A , оранжевые звездочки и Movie S1). В отличие от обычного митоза, когда митотические хромосомы притягиваются к полюсам клетки, генетическое содержимое в MNGC перетасовывается без какого-либо направления.К 15 часам 30 минутам после инфицирования генетическое содержимое MNGC стало менее конденсированным, и на мембране наблюдались три точки сжатия (рис. 4 A , белые стрелки). Однако сужения мембраны рассасывались к 16 ч 15 мин и не приводили к образованию дочерних клеток. Эти наблюдения предполагают, что MNGCs подвергались абортивному клеточному делению. Дефектный митоз способствует повреждению ДНК (42), что, как сообщается, приводит к индукции IFN типа I по пути cGAS – STING (43⇓⇓ – 46).Таким образом, мы оценили показатели реакции на повреждение ДНК, которые активируются в ответ на повреждение ДНК. Моноубиквитинирование h3AX, индуцированное при двухцепочечных разрывах ДНК, инициирует передачу сигналов о повреждении ДНК за счет привлечения мутировавшей атаксии-телеангиэктазии (ATM). ATM, в свою очередь, фосфорилирует h3AX с образованием γ-h3AX, биомаркера повреждения ДНК (47). Более высокие уровни моноубиквитинированного h3AX и γ-h3AX были обнаружены в клетках, инфицированных B. thailandensis , по сравнению с клетками, инфицированными дефектным слиянием vgrG5-∆CTD (рис.4 B и SI Приложение , рис. S3 C ). Моноубиквитинированный γ-h3AX, биомаркер двухцепочечных разрывов, был более распространен в клетках, инфицированных B. thailandensis , чем в инфицированных клетках vgrG5-∆CTD– (рис. 4 B и SI, приложение , рис. S3 C ), предполагая, что двухцепочечные разрывы являются основной формой повреждения ДНК в слитых клетках. Мы также обрабатывали клетки MitoQ, ингибитором митохондриального стресса, чтобы определить, могут ли митохондрии быть источником повреждения и утечки ДНК, чтобы вызвать экспрессию гена IFNB1 , но не обнаружили различий из-за лечения ( SI Приложение , рис.S3 D ). Вместе эти данные демонстрируют, что слияние клетки с клеткой запускает активацию cGAS и последующую экспрессию гена IFN типа I через повреждение ДНК. Burkholderia -индуцированные MNGCs обладают повышенной геномной нестабильностью, которая может быть обнаружена cGAS. ( A ) Конфокальные микрофотографии B. thailandensis tssA :: mApple -инфицированных клеток HepG2 с 13 ч 45 мин до 17 ч 30 мин после инфицирования. Периферия и ядра клеток помечены CellMask и Hoechst, представлены пурпурным и синим цветом соответственно.Бактерии представлены красным цветом. Оранжевые звездочки указывают на митотические хромосомы, белые стрелки указывают на точки сужения. Желтые стрелки обозначают рассеяние мембранного сужения. (Масштабная шкала, 20 мкм.) ( B ) Экспрессия маркеров повреждения ДНК в слитых клетках. Клетки TRAMP C2 инфицировали опытным слиянием клеток B. thailandensis и дефектным по слиянию vgrG5-∆CTD при MOI 10. Общие лизаты собирали через 18 часов после инфицирования. Белки разделяли на 4-15% геле SDS и анализировали с помощью иммуноблоттинга с антителами против γ-h3AX и h3AX.Вестерн-блоттинг против β-актина был включен в качестве контроля. ( C ) Влияние клеточно-клеточного слияния, индуцированного инфекцией B. thailandensis , на геномную нестабильность. Клетки HepG2 были инфицированы штаммами B. thailandensis при MOI 50. Слитые клетки HepG2, инфицированные B. thailandensis , и неслитые клетки, инфицированные vgrG5-∆CTD , исследовали на наличие образования микроядер через 19 ч после инфицирования. Возникновение микроядер определяли количественно как количество микроядер на каждое исследованное ядро и выражали как среднее значение из трех биологических повторов ± стандартное отклонение.Неинфицированные клетки были включены в качестве контроля. * P ≤ 0,05. ( D — F ) Конфокальные микрофотографии B. thailandensis tssA :: mApple инфицированных клеток HepG2 для визуализации микроядер. ( D ) Клетки инфицировали B. thailandensis tssA :: mApple с MOI 50: 1. Инфицированные клетки фиксировали через 19 часов после инфицирования для мечения ядер клетки-хозяина, ядерного ламина B1 и периферии клетки. B. thailandensis экспрессируют флуоресцентный белок mApple.Клетки визуализировали под конфокальным микроскопом при увеличении 63 ×. Ядра показаны синим цветом, ядерный ламин B1 — зеленым, периферия клеток — пурпурным, а бактерии — красным. Представленное наложенное составное изображение было автоматически сгенерировано программным обеспечением ZEN после получения изображения при сканировании плитки 5 × 5. Зона MNGC выделена белой линией. (Масштабная шкала, 100 мкм.) ( E ) Области, обозначенные желтыми прямоугольниками в D , были увеличены для визуализации микроядер.Белые стрелки указывают на разрыв микроядер. Желтые звездочки указывают на отсутствие совместной локализации между агрегатами ДНК с ядерным ламином B1. ( F ) Области, обозначенные красным прямоугольником на первых панелях E , были дополнительно увеличены для более четкой визуализации микроядер. Белые стрелки указывают на разрыв микроядер. Отсутствие совместной локализации между агрегатами ДНК с ядерным ламином B1 отмечено желтыми звездочками. ( G и H ) Локализация cGAS в клетках HepG2, инфицированных B.thailandensis и дефектный по слиянию клеток vgrG5-∆CTD . Клетки HepG2 инфицировали при MOI 50 и фиксировали через 19 ч после инфицирования для иммуноокрашивания cGAS, которые показаны зеленым. Ядра и периферию клеток были помечены с помощью Hoechst и CellMask, представленные синим и пурпурным цветом соответственно. Белые стрелки указывают на совместную локализацию cGAS и микроядер. Колокализация между агрегатами ДНК с cGAS отмечена желтыми звездочками. ( G ) Клетки визуализировали при увеличении 63 ×.(Масштабная шкала, 50 мкм.) ( H ) Области совместной локализации cGAS с микроядрами или агрегатами ДНК были увеличены из других полей зрения B. thailandensis инфицированных клеток HepG2. (Масштабная шкала, 20 мкм.) Отличительным признаком повреждения ДНК и абортивного деления клеток является нестабильность генома и образование микроядер (48⇓ – 50). Мы исследовали возникновение микроядер, окрашивая B. thailandensis -инфицированные клетки HepG2 с помощью окрашивания ядерной ДНК Hoechst 33342.Поскольку сообщалось, что cGAS связывает микроядерную ДНК при разрыве и коллапсе ядерной оболочки (28), мы также пометили инфицированные клетки маркером ядерной оболочки, ядерным ламином B1, для оценки целостности ядерной оболочки. Наблюдалось значительное увеличение количества микроядер в B. thailandensis-, инфицированных MNGC, по сравнению с неслитыми vgrG5-∆CTD -инфицированными или -неинфицированными клетками (рис. 4 C — F ), что указывает на усиление геномная нестабильность в слитых клетках, вероятно, связана с митотическими ошибками.Иммунофлуоресцентный анализ с использованием антител к ламину B1 показал, что часть микроядер была разорвана, о чем свидетельствует отсутствие окрашивания ламина B1 (фиг. 4 E и F ). Интересно, что мы также наблюдали большие агрегаты ДНК внутри MNGCs, которые не были окружены ядерной оболочкой (Fig. 4 E и F ). Поскольку cGAS может получить доступ к генетическому материалу внутри микроядер во время разрыва ядерной мембраны, отсутствие компартментализации крупных агрегатов ДНК в цитозоле может способствовать связыванию cGAS.Действительно, мы наблюдали, что cGAS колокализуется с частью микроядер, а также с крупными агрегатами ДНК в инфицированных B. thailandensis- клетках, которые формируют MNGC (рис. 4 G и H ). Мы также наблюдали совместную локализацию cGAS с микроядрами и обнаружили увеличение встречаемости микроядер в слитых клетках, опосредованных PEG-6000, по сравнению с неслитыми клетками ( SI Приложение , рис. S3 E — G ). Вместе эти данные указывают на то, что неестественное слияние клеток приводит к нестабильности генома и образованию микроядер. Сообщалось, что активация cGAS – STING приводит к различным способам гибели клеток (51 (– 55). Таким образом, мы исследовали возможность гибели клеток в слитых клетках, индуцированных бактериями. Клетки с нокаутом RAW cGAS и STING, инфицированные B. thailandensis , имели значительно меньшую гибель клеток по сравнению с клетками дикого типа, инфицированными B. thailandensis (фиг. 5 A и B ).Это также наблюдалось в клетках TRAMP C2, где B. thailandensis -инфицированные STING клетки имели более низкую цитотоксичность по сравнению с B. thailandensis -инфицированными клетками дикого типа ( SI Приложение , рис. S4 A ). Здесь повторное инфицирование клеток-хозяев было предотвращено добавлением антибиотиков в среду. Более высокие уровни цитотоксичности соответствовали более низкой внутриклеточной бактериальной нагрузке, что указывало на высвобождение бактерий в среду во время гибели клеток ( SI Приложение , рис.S4 B и C ). Чтобы исследовать, зависит ли наблюдаемая индукция цитотоксичности от передачи сигналов, опосредованной IFN I типа, мы исследовали количество IFN-β, продуцируемое инфицированными клетками. Клетки, инфицированные B. thailandensis дикого типа и штаммами с дефектом слияния ∆clpV5 и ∆bimA∆motA2 , продуцировали аналогичные низкие концентрации IFN-β (рис. 5 C ), которые не коррелировали с дифференциальная экспрессия генов, наблюдаемая между инфицированными клетками дикого типа и мутантными клетками.Уровни транскриптов IFN регуляторного фактора 7 (IRF7), которые опосредуют продукцию IFN типа I и активируются во время передачи сигналов IFN типа I, также были одинаковыми между клетками, инфицированными B. thailandensis и vgrG5-∆CTD , несмотря на различие Экспрессия гена IFNB1 (фиг. 5 D ). Эти данные показывают, что слияние клеток индуцирует экспрессию гена IFN типа I, но не приводит к продукции или передаче сигналов нижестоящего белка. Блокирование рецептора IFN1 типа I IFNAR1 во время инфекции не влияло на цитотоксичность (рис.5 E ) и внутриклеточные бактериальные нагрузки ( SI Приложение , рис. S4 D ). Эти данные показывают, что слияние клеток с клетками вызывает гибель клеток посредством передачи сигналов cGAS – STING независимо от IFN типа I. Активизация cGAS и STING, запускаемая слиянием клеток, приводит к усилению цитотоксичности независимо от передачи сигналов IFN I типа. ( A и B ) Влияние клеточно-клеточного слияния на цитотоксичность и ее зависимость от пути cGAS – STING. ( A ) Макрофаги дикого типа RAW-Lucia-ISG и макрофаги с нокаутом cGAS были инфицированы B.thailandensis и дефектные по слиянию клеток vgrG5-∆CTD при MOI 10. Клетки оценивали на цитотоксичность с помощью анализа ЛДГ через 18 часов после инфицирования. ( B ) RAW-Lucia-ISG дикого типа и макрофаги с нокаутом по STING были инфицированы B. thailandensis и дефектным по слиянию клеток vgrG5-∆CTD при MOI 10. Клетки оценивали на цитотоксичность с помощью анализа LDH при 17 ч после заражения. Анализы проводили в трех повторностях, и значения выражали как среднее ± стандартное отклонение.( C ) Продукция IFN-β макрофагами RAW264.7, инфицированными B. thailandensis и различными мутантами T6SS5. Клетки инфицировали при MOI 10 и оценивали продукцию IFN-β с помощью ELISA через 24 часа после инфицирования. Анализ проводили в трех повторностях, и значения выражены как среднее ± стандартное отклонение. ( D ) Эффекты индукции гена IFNB1 на нижестоящую экспрессию гена IRF7 в макрофагах RAW264.7, инфицированных B. thailandensis и дефектными по слиянию vgrG5-∆CTD .Клетки инфицировали при MOI 10: 1 и подвергали блокаде передачи сигналов IFN типа I через 8 часов после инфицирования с использованием антител, блокирующих рецептор IFNAR1. В эксперимент были включены контроли, обработанные изотипом. Транскрипты собирали через 18 ч после заражения. Уровни транскриптов IFNB1 и IRF7 измеряли с помощью qRT-PCR и нормализовали для неинфицированных клеток при каждой обработке с использованием метода порогового цикла (2 — ΔΔ Ct) с β-актином в качестве контрольного гена. Анализ проводили в трех экземплярах, и значения выражали как среднее ± стандартное отклонение.( E ) Влияние передачи сигналов IFN типа I на цитотоксичность в макрофагах RAW264.7, инфицированных B. thailandensis и дефектных по слиянию клеток vgrG5-∆CTD . Клетки инфицировали при MOI 10: 1 и подвергали блокаде передачи сигналов IFN типа I через 8 часов после инфицирования с использованием антител, блокирующих рецептор IFNAR1. В эксперимент были включены контроли, обработанные изотипом. Клетки оценивали на гибель клеток с помощью анализа ЛДГ через 18 часов после инфицирования. Анализ проводили в трех повторностях, и значения выражены как среднее ± стандартное отклонение.* P ≤ 0,05; ** P ≤ 0,01; *** P ≤ 0,001; n.s., не имеет значения; нет данных не обнаружен. Путь cGAS – STING, как было показано, важен для гибели аутофагических клеток во время репликативного кризиса, чтобы ограничить геномную нестабильность (51). Также было обнаружено, что домен STING, ответственный за активацию TBK и IRF3, ведущую к экспрессии IFN типа I, отделен от области, ответственной за индукцию аутофагии (55).Следовательно, мы исследовали возможность того, что слияние клетки-клетки запускает цитотоксичность через cGAS-STING-зависимую аутофагию. Превращение LC3-I в LC3-II путем конъюгации фосфатидилэтаноламина считается надежной мерой образования аутофагосом и, следовательно, указывает на активацию аутофагии (56). Мы обнаружили, что клеток B. thailandensis показали более высокие уровни соотношений LC3A-II / LC3A-I, чем неинфицированные или vgrG5-∆CTD -инфицированные клетки (рис. 6 A ).Нокаутные по STING клетки, инфицированные B. thailandensis , не показали более высоких соотношений LC3A-II / LC3AI по сравнению с клетками дикого типа (фиг.6, A ), что коррелирует с гораздо более низкой цитотоксичностью у cGAS и STING нокаутных клеток (фиг. 5 A и B и SI Приложение , рис. S4 A ). Кроме того, слияние клеток, индуцированное ПЭГ, привело к усилению цитотоксичности, что соответствовало увеличению отношения липидированного LC3B-II к LC3B-I ( SI Приложение , рис.S4 E и F ). Слияние клеток с клетками приводит к зависимой от cGAS – STING аутофагической гибели клеток. ( A ) Индукция аутофагии в клетках TRAMP C2, инфицированных B. thailandensis и vgrG5-∆CTD . Чтобы исследовать индукцию аутофагии через путь STING, TRAMP C2 и соответствующие ему клетки STING KO были инфицированы способным к слиянию клеткам B. thailandensis и дефектным слиянием клеток vgrG5-∆CTD при MOI 10.Общие лизаты собирали через 22 часа после инфицирования. Белки разделяли на 4-15% геле SDS и анализировали с помощью иммуноблоттинга с антителами против LC3A. Вестерн-блоттинг против β-актина был включен в качестве контроля. Интенсивность полос оценивали для трех биологических повторов с помощью денситометрического анализа и представляли как среднее отношение LC3AII / LC3AI или средние условные единицы (AU) ± SD. ( B ) Влияние аутофагии на цитотоксичность в клетках HepG2, инфицированных B. thailandensis и дефектными по слиянию vgrG5-∆CTD .Клетки HepG2 трансфицировали скремблированной РНК NC-1 или миРНК ATG-7 для нокдауна ATG-7. Трансфицированные клетки инфицировали при MOI 50: 1. Клетки оценивали на цитотоксичность с помощью анализа ЛДГ через 24 часа после инфицирования. Анализ был выполнен с тремя биологическими повторностями, и значения выражены как среднее ± стандартное отклонение. ( C ) Световые микрофотографии скремблированной РНК NC-1 или трансфицированных миРНК ATG-7 клеток HepG2, инфицированных B. thailandensis . Клетки инфицировали при MOI 50 и фиксировали для окрашивания по Гимзе и визуализации образования MNGC через 24 часа после инфицирования.(Шкала 100 мкм.) * P ≤ 0,05; ** P ≤ 0,01; *** P ≤ 0,001; n.s., не имеет значения. Чтобы проверить, приводит ли индукция аутофагии во время слияния клеток к гибели клеток, мы выполнили нокдаун малой интерферирующей РНК (миРНК) важного гена аутофагии, ATG-7, и подвергли клетки инфекции B. thailandensis . Нокдаун ATG-7 привел к значительному снижению цитотоксичности во время инфекции B. thailandensis по сравнению с контролем, трансфицированным скремблированной РНК (рис.6 В ). Трансфекция скремблированной РНК или ATG-7 не влияла на образование MNGC во время инфицирования B. thailandensis (фиг. 6 C ). Ингибирование аутофагии бафиломицином A1 в B. thailandensis -инфицированных клетках дикого типа также привело к снижению цитотоксичности по сравнению с клетками, обработанными ДМСО отрицательным контролем, что указывает на то, что аутофагия вносит вклад в зависимую от слияния гибель клеток ( SI Приложение , Рис. S4 G ). Эти данные подтверждают, что аутофагическая гибель клеток происходит во время слияния клеток. Мы оценили выживаемость мышей с нокаутом cGAS после острой и хронической инфекции. Во время острой инфекции не наблюдалось различий в смертности между мышами дикого типа и мышами с нокаутом cGAS ( SI, приложение , рис. S5). Напротив, мыши с нокаутом cGAS явно выживали дольше во время более хронической инфекции, хотя статистический анализ с помощью теста Гехана-Бреслоу-Уилкоксона ( P = 0,4471) показал, что различия не являются значимыми.Наши результаты показывают, что путь cGAS – STING может парадоксальным образом способствовать усилению бактериального патогенеза, возможно, ускоряя гибель клеток и распространение бактерий за счет высвобождения внутриклеточных бактерий только при низкой дозе инфекции, и даже в этом сценарии это явно не тот вариант. заболевание, контролирующее основной путь. B. pseudomallei — факультативный внутриклеточный патоген, ответственный за мелиоидоз, который, по оценкам, убивает 89 000 человек во всем мире в год (1).После того, как бактерии вышли из эндосомных компартментов в цитозоль, B. pseudomallei запускает слияние инфицированных клеток с соседними клетками (10). Индукция клеточно-клеточного слияния Burkholderia традиционно рассматривается как стратегия, подобная троянскому коню, позволяющая бактериям скрыться от иммунного обнаружения, позволяя при этом локализованное распространение бактерий во время хронической инфекции (6). Вопреки этой общепринятой парадигме, мы обнаружили, что MNGC, индуцированные Burkholderia , не являются неподвижными делами, которые остаются незамеченными.Фактически они запускают активацию пути cGAS – STING, воспринимающего ДНК хозяина, что приводит к гибели аутофагических клеток. Активация пути cGAS – STING с помощью MNGCs происходит через повреждение ДНК и образование микроядер. Наше открытие молекулярных механизмов, относящихся к индуцированному Burkholderia слиянию клеток, также распространяется на химически индуцированное слияние клеток, а также на различные типы клеток, включая первичные hMSCs, демонстрируя, что это потенциально общий механизм, запускаемый существенным слиянием клетки-клетки. До нашей работы нарушение мембраны, вызванное слиянием липосом и оболочечных вирусных клеток, считалось опасным сигналом, ведущим к активации STING (39, 40). Однако механизм активации STING этими видами мембранных нарушений не определен. Мы обнаружили, что слитые клетки имеют повреждение ДНК и повышенную геномную нестабильность, которые в последние годы обнаруживаются с помощью cGAS – STING (28, 43, 48–51, 55, 57, 58). Наши наблюдения, что MNGC подвергаются абортивному клеточному делению (рис.4 A и Movie S1) показывает, что повреждение ДНК вводится, когда происходит слияние клетки-клетки между несинхронизированными клетками. Поскольку слияние липосом и слияние оболочечных вирусов и клеток не образуют гетерокарионов, приводя к нарушению регуляции клеточного цикла, маловероятно, чтобы эти режимы мембранных нарушений запускали STING посредством одного и того же механизма. В то время как многоядерные клетки в гранулемах в Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guerin (бацилла Кальметта-Герена) и Mycobacterium tuberculosis на животных моделях также были описаны как укрывающие двухцепочечные разрывы, образование MNGCs было вызвано недостаточностью эндо-цитокинезии. не клеточно-клеточное слияние (59).Здесь важно отметить решающее отличие: микобактерии не обладают присущей им способностью к слиянию клеток, в то время как Burkholderia обладают. Остается исследовать, могут ли такие поликарионы запускать сходную активацию cGAS-STING и их последующие ответы. Ранее были сообщения о химически индуцированных слитых клетках или вирус-индуцированных синцитиях с геномными изменениями, включая разрывы ДНК и хромосомную нестабильность (60–62). MNGC у пациентов с мелиоидозом человека также обнаруживали аномальный генетический материал, включая диффузный хроматин и ядра, которые выглядели полилобатными с неровными краями (16), аналогично тому, что мы наблюдали в нашем B.thailandensis in vitro, модель инфекции HepG2. Литература 1960-х и 1970-х годов сообщала о преждевременной конденсации и измельчении хромосом в асинхронно слитых клетках (63⇓ – 65), событиях, в которых возможно повреждение ДНК. Накопление повреждений ДНК и нестабильность генома увеличивает шансы злокачественной трансформации. Фактически, события слияния клеток были предложены для облегчения приобретения злокачественных свойств. Это подтверждается сообщениями о том, что потомство слитых клеток обладает повышенной метастатической способностью и более канцерогенными (66⇓⇓⇓⇓ – 71). С другой стороны, можно утверждать, что слияния клеток вносят вклад в естественную защиту от злокачественных новообразований посредством активации cGAS – STNG. Становится все более очевидным, что раковые клетки, подвергающиеся остановке клеточного цикла или репликативному кризису, несут повреждения ДНК и различные хромосомные аномалии и нестабильность, которые могут привести к гибели клеток. Сообщалось, что запуск IFN типа I по пути cGAS – STING запускает опухолевый иммунитет (43, 57, 72⇓⇓⇓⇓⇓ – 78). Также недавно было описано, что трансформированные клетки подвергаются аутофагической гибели посредством пути cGAS-STING посредством механизма, отличного от индукции IFN типа I (55).Отражая это открытие, мы продемонстрировали, что слияние клеток с клетками также приводит к активации аутофагии и соответствующей гибели клеток посредством пути cGAS – STING, независимо от IFN типа I. Обширная геномная нестабильность, вероятно, останавливает синтез белка, поскольку клетки подвергаются аутофагической гибели. Таким образом, возможно, что индуцированные Burkholderia слияния клеток увеличивают риск злокачественной трансформации клеток посредством предложенного нами механизма и функции пути cGAS-STING, чтобы ограничить этот процесс.Следовательно, дефекты пути cGAS-STING могут потенциально предрасполагать хозяина к развитию рака в обстоятельствах, когда происходят неестественные слияния клетки-клетки, включая индуцированные вирусом слияния клетки-клетки, такие как те, которые опосредованы ВИЧ. B. pseudomallei и B. thailandensis являются сапрофитами окружающей среды и случайными патогенами человека. В чем может заключаться эволюционное преимущество поддержания энергозатратной системы секреции, объединяющей клетки млекопитающих? Естественная среда обитания бактерии в почве может подвергнуть ее воздействию одноклеточных организмов, таких как амебы, живущие в колонии, которые напоминают многоклеточный организм.T3SS3 и T6SS5 Burkholderia могли развиться с адаптацией, чтобы избежать амебной защиты. Способность объединить колонию одноклеточных амеб с образованием многоядерной гигантской амебы, по-видимому, является умным решением для увеличения радиуса инфицирования и прямого доступа к цитозольным компартментам без многократных циклов выхода и входа через фагосомы. Хотя путь cGAS-STING в основном участвует в ответах IFN типа I у позвоночных, C-концевой хвост STING, критический для рекрутирования компонентов передачи сигналов IFN типа I TBK1 и IRF3, отсутствует у беспозвоночных (79, 80).Поэтому постулируется, что индукция IFN типа I является относительно недавно появившейся функцией передачи сигналов cGAS – STING (79). Считается, что предковой функцией STING является индукция аутофагии, поскольку STING от примитивного беспозвоночного, морского анемона, как было показано, вызывает гибель аутофагических клеток, но не продукцию IFN типа I (55). Многоклеточные млекопитающие-хозяева развили путь cGAS-STING для борьбы с вторжениями цитозольной ДНК, будь то из-за геномной нестабильности или чужеродной ДНК для индукции IFN типа I, но также сохранили инициацию аутофагической гибели клеток при катастрофических обстоятельствах.Учитывая, что Burkholderia не эволюционировала и не адаптировалась для встречи с млекопитающими-хозяевами, последующая смерть клетки-хозяина, вызванная cGAS-STING, и исход, возможно, не адаптировались ни к преимуществу бактерий, ни к преимуществу хозяина. Это также может объяснить относительно слабый эффект в патогенезе инфицированных мышей с нокаутом cGAS по сравнению с мышами дикого типа. Таким образом, мы обнаружили случай образования микроядер, запускающих патоген, посредством индукции слияния клеток-хозяев, тем самым активируя путь cGAS – STING и последующую гибель клеток ( SI Приложение , рис.S6). Мы предполагаем, что во время инфекции или фузогенного химического воздействия слияние клеток с клетками является опасным сигналом, воспринимаемым сенсорами врожденного иммунитета хозяина cGAS и STING. Тело, вероятно, демонстрирует дифференцированный ответ; меньшие вторжения патогенов в цитозоль приводят к эффективному иммунному ответу IFN типа I и аутофагии, которые могут служить для удаления цитозольных патогенов при активации cGAS. Однако обширное слияние клеток является катастрофическим событием, приводящим к аберрантному и прерванному митозу, что приводит к повреждению ДНК и геномной нестабильности.Это, в свою очередь, вызывает аутофагическую гибель клеток вместо продуктивного ответа IFN типа I с конечной целью ограничения клеточной трансформации. Еще предстоит выяснить, проявляют ли пациенты с хроническим мелиоидозом повышенную предрасположенность к раку, и если да, то есть ли у этих пациентов мутации в путях cGAS-STING или аутофагии, которые ослабят естественную защиту организма от нежелательных слияний клеток. Все бактериальные штаммы, использованные в этом исследовании, перечислены в Приложении SI , Таблица S2. Бактериальные штаммы обычно поддерживали на агаре с бульоном для лизогени (LB). Мутанты были получены из штамма E264 методом аллельного обмена. Плазмиды и праймеры, использованные для создания мутантов, перечислены в SI, приложении , таблицах S2 и S3, соответственно. Подробная информация о конструкции мутанта приведена в Приложении SI . См. SI Приложение для получения более подробной информации о культуре клеток и обслуживании. Поскольку уровни экспрессии T6SS5 выше при выращивании бактерий в RPMI1640 (Gibco) по сравнению с DMEM, среду перед заражением заменили на RPMI, содержащую 10% FBS. Клетки инфицировали стационарными ночными культурами штаммов Burkholderia при указанных MOI и центрифугировали при 250 × g в течение 5 мин при комнатной температуре. Через 1-2 часа заражения добавляли канамицин (Sigma) для уничтожения внеклеточных бактерий при конечных концентрациях 250 мкг / мл и 300 мкг / мл для B.pseudomallei и B. thailandensis соответственно. Для инфекций с участием клеток HepG2 бактерии опсонизировали 50% сывороткой крови человека (Sigma) перед инфицированием в течение 1 ч при 37 ° C со встряхиванием. Для оценки эффекта ответа IFN типа I в поздней фазе клетки обрабатывали антителом, блокирующим рецептор IFNAR1, 10 мкг / мл (eBioscience, 16-5945-85) или его соответствующим изотипическим контролем (eBioscience, 16-4714). −82) через 8 ч после заражения. Для химически индуцированных слияний клетки-клетки клетки инкубировали с 50% (вес / объем) PEG-6000 или D-PBS в качестве отрицательного контроля в течение 2 минут при 37 ° C, 5% CO 2 .После обработки клетки трижды промывали питательной средой для удаления остаточного PEG-6000. Клетки HepG2 одновременно высевали и трансфицировали 30 нМ миРНК ATG-7 (hs.Ri.ATG7.13.1, Integrated DNA Technologies) или скремблированной РНК (NC-1 DsiRNA, Integrated DNA Technologies). Через 3 дня трансфицированные клетки обрабатывали трипсином для повторного посева и ретрансфекции 30 нМ миРНК ATG-7 или скремблированной РНК NC-1. Через 3 дня клетки использовали для B.thailandensis при указанной MOI. Тотальную РНК выделяли с использованием PureZOL (Bio-Rad) и illustra RNAspin Mini Kit (GE Healthcare). кДНК синтезировали с использованием набора RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit (Thermo Scientific). Транскрипты были количественно определены с использованием iQ SYBR Green Supermix (Bio-Rad) в системе обнаружения ПЦР в реальном времени CFX Connect (Bio-Rad). Праймеры для ПЦР перечислены в SI Приложение , Таблица S4. Для генов-хозяев относительные уровни РНК конкретного гена были нормализованы к D-PBS-обработанным или неинфицированным контролям с использованием метода порогового цикла (2 -ΔΔ Ct) с β-актином в качестве контрольного гена.Ген домашнего хозяйства GADPH использовали в качестве внутреннего контроля. Для бактериальных генов относительные уровни РНК генов в мутантных штаммах были нормализованы к дикому типу с использованием метода 2 -ΔΔ Ct с 16S в качестве контрольного гена. rpoB использовали в качестве внутреннего контроля. Клетки фиксировали 100% метанолом (Fischer Scientific) в течение 2 минут, один раз промывали дистиллированной водой и окрашивали 20-кратно разбавленным красителем Гимза (Sigma) в течение 15 минут.После окрашивания клетки один раз промывали дистиллированной водой и сушили на воздухе. Окрашенные клетки исследовали с помощью световых микроскопов (Olympus Model CKX53 или IX51) и изображения получали с помощью камеры для микроскопа Lumenera InfinityX и программного обеспечения Infinity Capture при увеличении объектива 10 ×. Цитотоксичность клеток измеряли путем анализа высвобождения лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в супернатантах клеток с использованием набора для анализа ЛДГ (Clontech). Клетки HepG2 инфицировали флуоресцентным mApple B. thailandensis с MOI 50. Канамицин добавляли до конечной концентрации 300 мкг / мл через 1 час после заражения. Перед визуализацией среду заменяли на RPMI, содержащую 10% FBS, 10 мкг / мл Hoechst 33342 и 0,1 мкл / мл CellMask Deep Red Plasma для окрашивания мембран. Клетки визуализировали с помощью LSM710 (Zeiss) при увеличении 63 × от 13 ч 45 мин до 17 ч 30 мин после инфицирования с интервалами 15 мин. Клетки фиксировали в 4% параформальдегиде (Sigma) в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем клетки пермеабилизировали 0,25% (об. / Об.) Тритоном-X в течение 10 минут при комнатной температуре и блокировали окрашивающим буфером, 5% FBS, 2% BSA (HyClone) и 0,1% (об. / Об.) Тритоном-X ( Merck) в 1 × PBS в течение 30 мин при комнатной температуре. Для визуализации ядерной оболочки клетки окрашивали кроличьим антителом против ламина B1 (ab16048, Abcam) в течение ночи при 4 ° C и затем окрашивали вторичным антителом Alexa Fluor 488 против кроличьего антитела (Invitrogen) при комнатной температуре в течение 2 часов.Для локализации cGAS в микроядрах клетки окрашивали кроличьим антителом против cGAS (D1D3G, Cell Signaling Technologies) в течение ночи при 4 ° C, а затем антителом против кролика Alexa Fluor 555 (Invitrogen) при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем клетки окрашивали 10 мкг / мл Hoechst 33342 (ThermoScientific) и разбавленным 1: 10 000 красителем для мембран CellMask Deep Red Plasma (Invitrogen). Между каждым этапом инкубации клетки промывали 0,1% Triton-X (Merck). Покровные стекла помещали на чистые предметные стекла с помощью ProLong Gold Antifade (Invitrogen) и отображали на конфокальном микроскопе Zeiss LSM710 с использованием линзы объектива 63x. Конфокальные микрофотографии слитых клеток оценивали на наличие микроядер. Были исследованы только MNGC, содержащие более пяти ядер. Неинфицированные или обработанные D-PBS клетки были включены в качестве отрицательного контроля. Микроядра подсчитывались вручную в соответствии со следующими критериями: 1) микроядра меньше одной трети размера ядра, но достаточно велики, чтобы различать форму и цвет; 2) микроядра имеют округлую форму; 3) микроядра расположены внутри клеточной границы, что определяется окрашиванием клеточной маски; 4) граница микроядер отличается от границы ядра.Общее количество оцененных ядер было пересчитано для нормализации по условиям. В каждом состоянии было исследовано не менее 150 ядер. Появление микроядер представлено как количество микроядер на каждое исследованное ядро. Локализацию cGAS в микроядрах определяли визуально по полному наложению сигналов cGAS на микроядра. Супернатанты культур получали для определения продукции IFN-β с помощью ELISA с использованием набора LEGEND MAX (Biolegend) в соответствии с инструкциями производителя в трех экземплярах. Клетки лизировали в 0,5% (об. / Об.) Triton-X с добавлением 1х смеси ингибиторов протеазной фосфатазы (Thermo Scientific). Лизаты центрифугировали при 6,500 × г в течение 10 мин при 4 ° C. Фракции супернатанта кипятили в 1 × SDS-буфере laemmli (Bio-Rad). Экстракцию гистоновой кислоты проводили в течение ночи при 4 ° C с использованием 0,2 н. HCl (химикат Spectrum) на осадке, который содержит интактные ядра. Обломки ядер удаляли центрифугированием при 6,500 × g в течение 10 мин при 4 ° C.Гистоны нейтрализовали 2М NaOH (Merck) перед кипячением в 1 × SDS-буфере Лэммли (Bio-Rad). Белки разделяли на 4-15% гелях SDS / PAGE (Bio-Rad) и переносили на нитроцеллюлозные мембраны (Thermo Scientific). Мембраны блокировали 5% BSA при комнатной температуре в течение 2 часов и зондировали специфическими антителами в течение ночи при 4 ° C. Антитела против h3AX, против γ-h3AX и против β-актина были получены от Invitrogen, Biolegend и Sigma, соответственно. Вторичные антитела, связанные с HRP, антитела против мыши и антитела против кролика, связанные с HRP, были получены от Abcam и Cell Signaling Technology, соответственно. Для обнаружения LC3A в клетках, инфицированных TRAMP C2, клетки лизировали и обрабатывали, как описано в Приложении SI . Все блоты проявляли с использованием реагента ECL plus (Thermo Scientific), а полосы визуализировали с помощью системы визуализации ChemiDoc MP (Bio-Rad). Денситометрический анализ проводился с использованием ImageJ. Двусторонний непарный тест Стьюдента t был проведен для определения статистической значимости 95% достоверности между двумя сравниваемыми образцами.Статистическая значимость 95% достоверности между тремя или более группами определялась с помощью ANOVA с последующим тестом Тьюки. Вся статистика проводилась с использованием программного обеспечения GraphPad Prism. Статистическая значимость указана следующим образом: * P ≤ 0,05; ** P ≤ 0,01; *** P ≤ 0,001. Исследования на животных прошли этическую проверку и были одобрены Комитетом по институциональному уходу и использованию животных Национального университета Сингапура в соответствии с руководящими принципами Национального консультативного комитета по исследованиям лабораторных животных.Национальный университет Сингапура — учреждение, аккредитованное Американской ассоциацией по уходу за лабораторными животными (Фредерик, доктор медицины). Все данные доступны в основном тексте SI и приложении . Мы благодарим Джеффа Миллера и Кристофера Тодда Френча (Калифорнийский университет, Лос-Анджелес) за предоставленные нам штаммы Burkholderia thailandensis ; Ли Шу Инь (Национальный университет Сингапура) за поддержку в области микроскопии; Mok Chee Keng (Национальный университет Сингапура BSL-3 Core Facility) за помощь в проведении экспериментов ABSL-3; Хайден Тан (Национальный университет Сингапура) за советы по процедуре нокдауна siRNA; и Heng-Phon Too (Национальный университет Сингапура) за любезный дар человеческих мезенхимальных стволовых клеток.Эта работа была поддержана Сингапурским национальным советом по медицинским исследованиям (NMRC / CBRG / 0052/2013), Министерством образования (MOE2018-T3-1-003) и Медицинской школой Йонг Лу Линь BSL-3 Core Facility и Национальным советом по медицинским исследованиям. , Центр Грант MINE, Исследовательский стержень № 4 (NMRC / CG / 013/2013). Автор: J.W.K.K. и Ю.-Х.Г. спланированное исследование; J.W.K.K., Y.C. и Y.-H.G. проведенное исследование; Y.C., S.G. и K.C.C. внесены новые реагенты / аналитические инструменты; Дж.W.K.K., B.J.W.L., K.C.C. и Y.-H.G. проанализированные данные; и J.W.K.K. и Ю.-Х.Г. написал газету. Авторы заявляют об отсутствии конкурирующей заинтересованности. Эта статья представляет собой прямое представление PNAS. Эта статья содержит вспомогательную информацию в Интернете по адресу https://www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.20067/-/DCSupplemental. Новый внедорожник Infiniti характеризуется как яркий, мощный и харизматичный внедорожник. Его дебют состоялся 29 ноября на популярной мировой выставке, которая проходила в Лос-Анджелесе в 2017 году. Новая модель Infiniti QX50 2019-2020 Модель среднего размера с уютным интерьером. Infiniti QX50 2 2018-2019 модельного года сочетает в себе элегантность, практичность и мускулистость. Давайте подробнее рассмотрим характеристики и новый внешний вид премьерного Infiniti. Разработчики постарались на славу и создали модную и стильную новинку, которая своим дизайном затмевает даже самые популярные варианты основных конкурентов, которые также были обновлены. Харизма нервюр на капоте и в районе боковин придает автомобилю яркость, установленные фары, отвечающие за головной свет, оснащены светодиодами. вид сзади нового Infiniti Есть верхняя решетка, это торговая марка.Передний бампер нового Infiniti KuX 50 отличается наличием большого количества аэродинамических деталей, придающих внешнему виду неповторимости … Вырезы под колесные арки специалисты называют просто огромными, а отличительную особенность придает стойка крыши, которая выглядит как ломаная линия. Светодиодные габаритные огни и бампер оснащены дополнительными элементами (патрубками выхлопной системы) в виде трапеции. В целом дизайн автомобиля в новом кузове выражает его индивидуальность, мощь и мужественность при отсутствии агрессивности. Интерьер Infiniti QX50 2018 — это отдельный разговор, эксперты оценили его роскошь, современность и деловой стиль. Внутреннее убранство впечатляет своей оригинальностью, оно трехцветное, производитель использует качественную кожу различных сортов. В отделке также присутствуют элементы из дерева, мягкого качественного пластика, мелкие детали из хромированного алюминия. салон Infinity CuX50 2018 Такое сочетание материалов создает неповторимый интерьер и восхищает даже самых привередливых автомобильных журналистов.Кожа используется для всех элементов интерьера — руля, панели, дверей, подлокотников, сидений и даже ручки КПП. Модель оснащена современным оборудованием, значительно облегчающим процесс управления внедорожником. Меня поразила интересная функция — проектор, у которого есть возможность отображать нужную информацию на стекле прямо перед водителем, то есть лобовое стекло. Конечно, есть электропривод, удобные кресла.Пассажиры на заднем ряду могут ощутить оригинальное движение по кабине на уникальных санях. Благодаря обновлению платформы, новая модель Infinity CuX 50 полностью изменила свои пропорции. Премьера существенно изменилась в габаритах, длина стала меньше на 51 мм, а ширина, наоборот, увеличилась на 102 мм. В высоту автомобиль также увеличился на 64 мм, но разработчики уменьшили колесную базу на 80 мм. В результате мы узнали следующие размеры: Новое поколение комплектуется легкосплавными дисками, диаметр которых может составлять от 19 до 20 дюймов. Для производства нового кузова внедорожника используется сверхпрочная сталь, которая имеет высокий уровень текучести — около 980 МПа. Вес самого кузова без дополнительного оборудования и покраски составляет примерно 419 кг, а уровень его жесткости также увеличен на 23 процента. Что касается багажника Infiniti QX50 2018 года, то он вмещает 895 литров, при этом загрузка должна осуществляться под крышей. При сложении сидений этот объем увеличивается до 1048 литров. Модель доступна в нескольких вариантах оснащения. Базовая комплектация — кожаный салон, электропривод и подогрев сидений, аудиосистема, климат-контроль. В цену также входит покраска в элегантный металлический цвет, алюминиевые диски, люк, доступ к двигателю без ключа зажигания, электрические стеклоподъемники, зеркала с подогревом.Установлены различные системы, контролирующие безопасность передвижения. В качестве дополнительной опции предлагается смоделировать движение автомобиля и передать эту информацию в виде виртуального изображения на большой экран, который отображается в цветном режиме. Также можно установить датчики слежения и оповещения о ситуации на дороге. Кроссовер 2-го поколения оснащается бензиновым двигателем с шестью цилиндрами и V-образным двигателем VC-Turbo объемом 2.0 литров. Мощность составляет 272 лошадиные силы … Модель с передним или полным приводом, скорость до 230 км / ч. Разгон до 100 километров осуществляется всего за 6,7 секунды на полном приводе и за 6,3 секунды на переднем приводе … На сотню километров дороги требуется 8,6-9,2 литра. Двигатель может работать в двух циклах и изменять не только степень сжатия, но и рабочий объем с 1997 см3 до 1970 см3, степень сжатия регулируется от 14: 1 до 8: 1 в зависимости от нагрузки. Одной из особенностей автомобиля является наличие интеллектуальной настройки привода. Водитель может выбрать оптимальный тип многодисковой муфты, исключающей пробуксовку и оптимизирующей расход топлива. Подвеска перед стойкой типа Макферсон независимая, а сзади многорычажная. в России начались 1 июля 2018 года. Стоимость строго зависит от комплектации и комплектации. Это: Все кроссоверы идут только с полным приводом. Видео тест-драйв Infiniti QX50 2019-2020: Фото новой модели Infiniti KuX 50: Как это случилось в японской компании, новый Infiniti QX50 2018 комплектации и цены будут выгодно отличаться от прайс-листов аналогичных кроссоверов Audi, BMW и Mercedes ниже. По доброй традиции — 2 500 000 рублей *, а разница между исходными комплектациями немецких моделей может достигать нескольких сотен тысяч рублей.Кроме того, после выхода Infiniti QX50 new нового поколения (фото) в конце текущего года в цену кроссовера с новым кузовом войдет недоступная для конкурентов новинка. Впервые в серийных технических характеристиках автомобиль представляет собой турбомотор с переменной степенью сжатия. Останется и полный привод, а сотрудничество с Mercedes будет означать наличие 9-ступенчатого автомата в качестве коробки передач. Комплектация нового кузова Infiniti QX50 2018 Новый вплотную приблизится к оснащению старшей модели с индексом «60», а стиль дизайна отражает дальнейшее развитие выбранного ранее направления, на которое ссылаются создатели. как «могучая элегантность». Начальные цены Infinity Cu X 50 у официальных дилеров в Москве начинаются с отметки 2 500 000 рублей * и предполагают наличие двух богато оснащенных версий. Уже базовая комплектация Elite способна порадовать: кожаный салон, 2-х зонный климат-контроль, электрорегулировка передних сидений с подогревом, аудиосистема премиум-класса, адаптивные фары, камера заднего вида и электрорегулировка двери багажника. После этого неудивительно, что в infinity цена QX50 2018 года с новым кузовом будет включать: алюминиевые колесные диски, металлическую краску, люк, кнопку запуска двигателя, передние и задние электрические стеклоподъемники, зеркала с подогревом и электропривод. водить машину.Пассивная и активная безопасность: в исходной конфигурации предусмотрены: 6 подушек безопасности, система стабилизации, датчики дождя, света и давления в шинах, противотуманные фары, датчики парковки, беспроводной телефон в режиме громкой связи и система мониторинга слепых зон. Flagship комплектация Hi- Tech , где цена Infiniti QX50 2 750 000 рублей *, дополнены: Российская навигационная система 08IT с информацией о ситуации на дорогах RDS-TMC и HDD диск, системы информирование о приближении объектов AOD и бесплатного парковочного места PSM, а также адаптивный круиз-контроль.Кроме того, кроссовер оснастят системой кругового обзора AVM, включающей 4 камеры и виртуальное изображение автомобиля на цветном дисплее, показывающее пространство вокруг. С точки зрения технических характеристик, все комплектации и цены Infiniti QX50 подразумевают наличие под капотом бензинового двигателя с турбонаддувом и переменной степенью сжатия 2,0 литра мощностью 272 л.с., полным приводом и 9- ступенчатая автоматическая коробка передач. Такой тандем позволяет достичь первой сотни за 6.5 секунд, заканчивая разгон на максимальной скорости 230 км / ч. Средний расход топлива составляет 6,7 литра на 100 км. Главной изюминкой в технических характеристиках нового Infiniti QX50 2018 года станет использование 2-литрового бензинового турбомотора с переменной степенью сжатия от 8: 1 до 14: 1. чем эффективнее мощность силового агрегата 272 л.с. и чем больше обороты, во избежание детонации происходит постепенное уменьшение степени сжатия до 8: 1 при полностью нажатой педали газа.Инновационный двигатель создаст достойную альтернативу заслуженной «шестерке» серии VQ, которая при аналогичном КПД потребляет на 30-35% больше топлива. Таким образом, Infiniti QX50 2018 по характеристикам новый оказался не хуже, чем показатели текущей версии с 3,7-литровым двигателем V6 для американского рынка, который разгоняется до 100 км / ч за 6,5 секунды, достигая 250 км. / ч максимальная скорость. При этом средний расход топлива уменьшился на 9,8 литра на 100 км, исходя из вышеупомянутой разницы в 30-35 процентов. Впервые новый кузов Infinity QX50 2018 (фото) был показан год назад в Китае в виде концепт-кара Sport Inspiration. Яркий и смелый внешний вид концепта на пути к конвейеру не потерял актуальности в лице предсерийного образца, представленного на Международном автосалоне в Детройте. Стремительный внешний вид нового кузова Infiniti QX50 2018 лишился только камер заднего вида вместо привычных зеркал, сохранена стремительность внешнего вида, а остальные элементы были немного переработаны для массового производства.Также в Детройте был впервые рассекречен интерьер долгожданной новинки, что при всей своей футуристичности не дает никаких сомнений в том, что перед нами финальная версия нового японского бренда кроссоверов премиум-класса. Отделка салона выполнена в трехцветной гамме, а материалы обивки: натуральная кожа, нубук, дерево и качественный мягкий пластик. Сами создатели характеризуют внешний вид нового кузова Infinity QX50 2018 как мускулистый и практичный, а элегантный изгиб задней стойки, призванный улучшить обзор и визуально удлинить линию крыши, представляет собой полумесяц. Без преувеличения можно сказать, что Infiniti нового поколения QX50 2018 new (фото) вместе с внедрением электронного рулевого управления в седанах Q-Series помогут укрепить имидж марки не только как производителя престижных автомобилей. , но также как новатор во внедрении технических изысков. Что касается кроссовера нового поколения, то речь идет об инновационном моторе с переменной степенью сжатия.Подобные агрегаты ранее демонстрировались, но только в виде прототипов, но теперь Infiniti QX50 2018 станет первым в мире, кто примерил аналогичный двигатель в серийном исполнении. В дальнейшем этот 2-литровый бензиновый агрегат будет устанавливаться на другие модели японской компании, составляя уверенного конкурента легендарным «шестеркам» серии VQ как по экономичности, так и по экономичности. Новое поколение, существовавшее ранее в виде максимально приближенного к серийному производству образца, было успешно представлено в этом году.Дата выпуска Infiniti QX50 считается 29 ноября, а сам кроссовер уже будет считаться автомобилем 2018 модельного года. Судя по последним новостям, старт продаж Infiniti QX50 в России состоится летом будущего года. Более того, для выхода на наш рынок японский кроссовер должен пройти ужесточенные сертификационные испытания, связанные с необходимостью установки системы экстренного реагирования при авариях ЭРА ГЛОНАСС. Неплохо поднять infinity по цене QX50 2018 в глазах покупателей стоит японская сборка, что обычно означает: безупречное качество сборки, высокую надежность и долговечность нового автомобиля.А это, в свою очередь, позволяет надеяться на минимальные потери в остаточной стоимости и хорошую привлекательность кроссовера на вторичном рынке. * — приблизительные данные Новое поколение премиального кроссовера Infiniti QX50 2019-2020 года было официально представлено в первые дни автосалона в Лос-Анджелесе.Модель 2-го поколения, по сравнению со своей, изменилась буквально во всем, получив новую платформу, другие пропорции кузова, более просторный салон с совершенно другой компоновкой и принципиально новое техническое оснащение … Новинка пойдет. в продаже в США весной 2018 года, а в России желающим купить машину придется подождать как минимум до лета. Цена обновленного Infiniti QX50 2018-2019 на нашем рынке будет объявлена позже, но, скорее всего, она будет колебаться в районе 2.5 млн руб. Остальная информация о внедорожнике, включая фотографии и технические характеристики, полностью раскрыта прямо сейчас, поэтому можно смело переходить к детальному обзору модели. Глобальное изменение концепции QX50 произошло, прежде всего, за счет перехода на новую платформу, унаследованную от «третьей». Фактически заднеприводную «тележку» заменили на переднеприводную, расположение двигателя стало не продольным, а поперечным.Кузов внедорожника в ходе модернизации серьезно увеличил свою жесткость, что является следствием широкого применения сверхвысокопрочных сталей (980 МПа), из которых все наиболее ответственные элементы конструкции, составляющие основу силовой каркас. В числовом выражении жесткость на кручение увеличилась на 23%. Изменение технической базы серьезно повлияло на размер и пропорции кузова Infiniti QX50. В новой версии кроссовер на 51 мм короче, на 102 мм шире и на 64 мм выше предыдущей модели.Имея длину 4694 мм, ширину 1902 мм и высоту 1679 мм, Infiniti нового поколения вошла в число конкурентов. Наряду с пересмотренными размерами Ku X 50 получил и другую колесную базу, которая составила 2800 мм вместо 2880 мм. Дорожный просвет машины увеличился со 165 до 218 мм. Доработанная техника и габариты кузова красноречиво говорят о том, что QX50 в результате обновления превратился в полноценный кроссовер, тогда как раньше он больше походил на приподнятый хэтчбек. Несмотря на довольно существенные изменения внешнего вида Infiniti QX50 намекает на каждую деталь японского премиального бренда. Спереди новинка красуется фирменной крупной решеткой радиатора с характерными ромбовидными ячейками, узкими фарами с современными модулями светодиодной оптики и эффектными штрихами ходовых огней, оригинальным бампером с аккуратными секциями воздухозаборников, капотом с агрессивным рельефом ребер. Фото Infiniti QX50 2018-2019 Задняя часть внедорожника оформлена не менее ярко, чем носовая часть.Его украшают стильные габаритные огни, визуально объединенные хромированной аркой, а также мощный бампер с двумя большими трапециями выхлопных труб. При осмотре автомобиля сбоку выявляется стремительный силуэт с изящными линиями, интересный зигзаг задних стоек крыши, очерченный тонкой хромированной полосой оконных рам и большие колесные арки, в которые легко помещаются 19 или 20-дюймовые диски, «обуты» в резину 235/55 R19 или 255/45 R20.Кстати, в моделях используются шины Run Flat со специальными усиленными боковинами, которые позволяют при проколе колеса добраться до ближайшего шиномонтажа, даже если он находится на расстоянии 150 км. Ассортимент эмалей кузова нового Infiniti QX50 будет варьироваться в зависимости от рынка продаж, но уже известно, что гамма оттенков порадует своей насыщенностью. Покупатели смогут рассчитывать как минимум на пять цветов: Liquid Platinum, Majestic White, Eclipse Black, Chestnut Bronze и Graphite Shadow.В США эту палитру дополнят еще четырьмя цветами, в Китае — двумя. Интерьер нового кроссовера Infiniti претерпел глубокую реформу, благодаря чему он стал максимально удобным для пассажиров обоих рядов сидений. Разумеется, наиболее удобные сиденья отведены водителю и гонщику по правую руку. Они смогут оценить все преимущества новых сверхкомфортных сидений с анатомической регулировкой, оснащенных электроприводом, подогревом и вентиляцией.На втором ряду после модернизации появилось значительно больше места как в плечевой области (сказывается увеличенная ширина), так и в области колен. Задний диван теперь может скользить по салону, освобождая дополнительное пространство для ног или увеличивая объем багажного отделения. Если отодвинуть сиденья до упора, то расстояние между спинками двух рядов сидений составит внушительные 983 мм, а в грузовом отсеке можно хранить до 895 литров (загрузка под потолком).Полное переднее положение обеспечивает вместимость 1048 литров, которая при сложении заднего ряда легко увеличивается до 1699 литров. Несколько блоков будут отвечать за информационную поддержку пассажиров и развлекательную составляющую в новом Infiniti Ku X 2-го поколения. Прежде всего, это два дисплея InTouch на центральной консоли. Верхний 8-дюймовый экран предназначен для отображения навигационных карт и системных сообщений, нижний 7-дюймовый экран — для управления климатическими и мультимедийными настройками.Климат-контроль в QX50, кстати, трехзонный, позволяющий задним пассажирам менять температуру. Если вернуться к комплексу InTouch, то в нем самый современный функционал с возможностью простой интеграции гаджетов, а также два метода управления: прикосновение или с помощью шайбы на центральном туннеле. Помимо основного мультимедийного комплекса, бортовые данные способны транслировать информационное табло (расположенное между классическими аналоговыми шкалами) и 9-дюймовый проекционный дисплей.Ряд функций настраивается с помощью кнопок на рулевом колесе, которое имеет удобный захват, что исключает утомляемость рук при длительной езде. Мы не будем подробно останавливаться на материалах отделки, так как очевидно, что здесь они исключительно качественные. Причем кожа лучших сортов используется не только для обивки сидений и дверных карт, но и для обивки передней панели. Цветовые сочетания, конечно же, выбираются только для радующих глаз.Теперь остановимся на еще не упомянутом, но доступном новом оборудовании QX50. Сюда входят подогрев руля и задних сидений, панорамная крыша с сдвижным люком, электрическая задняя дверь с функцией бесконтактного открывания с поворотом ноги под бампером, электронный стояночный тормоз, камеры кругового обзора (Around View Monitor ), подсветка с регулируемой интенсивностью, ионизатор воздуха, акустика премиум-класса Bose Performance с 16 динамиками и системой активного шумоподавления. В помощь водителю Infiniti QX50 был отправлен комплекс безопасности ProPilot.Он включает в себя предупреждение о лобовом столкновении, автоматическое торможение с обнаружением пешеходов, отслеживание полосы движения, мониторинг слепых зон, интеллектуальный круиз-контроль, адаптивное рулевое управление с прямым адаптивным рулевым управлением (DAP). Место под капотом Infiniti QX 50 занял неоспоримый 2,0-литровый двигатель VC-Turbo, являющийся настоящим сокровищем инновационных решений. Главная «особенность» агрегата — встроенный механизм коррекции положения верхних мертвых точек (ВМТ).При малых нагрузках смещается вверх, при высоких — вниз. Параллельно с перемещением ВМТ изменяется степень сжатия (варьируется от 14,0: 1 до 8,0: 1) и рабочий объем (с 1997 по 1970 куб. См). Среди других особенностей двигателя отметим наличие двух рабочих схем (по циклам Отто и Аткинсона), комбинированной системы впрыска, активной верхней опоры Active Torque Rod (генерирует колебания, противоположные по фазе, снижая общий уровень вибрации. блока питания).Все применяемые технологии позволили «снять» с двигателя мощность 272 л.с. (при 5600 об / мин) и крутящий момент 380 Нм (при 4400 об / мин). Одинарный двигатель сочетается с одним вариантом трансмиссии — 8-диапазонным вариатором. В базовых версиях кроссовера тяга направлена только на переднюю ось, в топовых модификациях доступен подключаемый полный привод с установленной многодисковой муфтой передней задней оси.Максимально на задние колеса передается 50% тяги (это бывает, например, при трогании с места). Рулевое управление нового QX50 имеет два варианта: стандартное с электроусилителем и дополнительное прямое адаптивное рулевое управление. Во втором случае между рулем и колесами отсутствует механическая связь, а передача команд осуществляется по проводам. Усилие рулевого управления регулируется путем выбора одного из трех режимов — По умолчанию, Динамический и Динамический +. Также в арсенале внедорожника есть селектор комплексного изменения ходовых характеристик.Он предоставляет четыре режима — Стандартный, Эко, Спорт и Персональный. Каждый из них влияет, помимо прочего, на работу адаптивных амортизаторов. Подвеска кроссовера, кстати, теперь построена по новой схеме: спереди — штатная стойка Макферсон, сзади — многорычажная. Если говорить о параметрах экономичности, то новая модель Infiniti будет потреблять в среднем около 8,7-9,1 л / 100 км. Одноклассники в этом плане чуть более «прожорливы».А вот динамические характеристики японской машины супер-выдающиеся. Переднеприводный QX50 тратит около 6,7 секунды на разгон от 0 до 97 км / ч, полноприводный — около 6,3 секунды. «Максимальная скорость» для обеих версий ограничена 230 км / ч. Такую же, а то и лучшую динамику демонстрируют конкуренты от Mercedes и Audi. Infiniti Q30 — результат сотрудничества японской и немецкой автомобильной промышленности.Что еще может быть лучше? В статье представлены технические характеристики, фото, видео и комплектация Infiniti Ku30. Действительно, полный привод, клиренс 178 миллиметров, и надо сказать, что Infiniti Ku30 превосходит свою соплатформенную GLA во всем. Немец по сравнению с японцем проигрывает по всем параметрам, от дизайна до мультимедиа. Более того, в стране восходящего солнца решили, что не стоит ограничиваться одним МБ, нужно собирать силовые агрегаты со всего мира.Так, например, здесь в модельном ряду можно найти 109-сильный двигатель Renault, но для России он недоступен. Капот — это утопленные, изогнутые, огромные колесные арки, заполненные колесами от 17 до 19 дюймов по спецификации. Кстати, в соплатформе можно найти даже 16 дюймов. Особого внимания заслуживает оптика. По задумке производителя это глаз, надо сказать очень похожий. Здесь спрятана светодиодная матрица, которая умеет заглядывать в поворот. Корм здесь, конечно, ни на что не похож. Хэтчбек полностью добил всех своих конкурентов.В нем столько экспрессии в сочетании с изяществом и элегантностью. Отсюда Infiniti Q30 выглядит подавленным, мускулистым, подтянутым. Широкая колея плавно переходит в узкую крышу, а продолжение волнообразных форм видно здесь в фонарях и ободке номерного знака. Сразу хочется отметить грубую ошибку дизайнеров, да и бренда в целом. Глянцевый черный пластик, конечно, красив, он полностью подчеркивает огромные хромированные патрубки выхлопной системы, но очень непрактичный, особенно для нашей страны. Панель приборов отличается от большинства вертикальным нулевым положением стрелок и светится как новогодняя елка. В отличие от Renault, здесь стрелочный указатель температуры уже в базовой конфигурации … В центре есть небольшой дисплей, показывающий показания многих систем, например бортового компьютера, систем контроля полосы движения, распознавания дорожных знаков, предотвращения лобового столкновения. , показывает расстояние до впереди идущей машины и многое другое.Нужны они или нет — каждый решает сам. Итак, первый силовой агрегат, который предлагается в России (а у нас линейка двигателей снова сильно сократилась) — это бензиновый двигатель мощностью 149 лошадиных сил. Кстати, в Европе он заявлен как 156-сильный, ну да ладно. Это бензиновая турбо четверка, которая ездит исключительно на породистом корме АИ-98. Стадо развивает 250 Нм крутящего момента. Этого, надо сказать, достаточно, чтобы почувствовать плавный, но достаточно быстрый разгон до сотни за 9,2 секунды. Максимальная скорость остановилась на отметке 210 км / ч.В городе такой двигатель будет потреблять 7,7 л бензина; по трассе потребуется не более 6 литров. Такой мотор работает в паре с неоспоримой 7-ступенчатой роботизированной коробкой с двумя мокрыми сцеплениями. Одно сцепление здесь обслуживает четные передачи, а другое — нечетные. Двигатель 1.6 комплектуется только передним приводом. Второй двигатель для российского рынка — это двухлитровая турбо четверка, тоже на бензине. Есть уже 211 лошадей, 350 Нм крутящего момента и 7,3 секунды до сотни. Если оценить массу автомобиля в полторы тонны, то это очень хорошо.Максимальная скорость была 230 км / ч, да и двигатель не сильно прожорливал. В смешанном цикле ему потребуется не более 6,9 литров бензина. Регулируемая гибель клеток (RCD), форма гибели клеток, которая регулируется генетически кодируемым молекулярным механизмом, 12 долгое время считалась иммунологически тихое или даже толерогенное событие.3 По крайней мере частично, это широко распространенное мнение возникло из очень толерогенной природы запрограммированной гибели клеток (PCD), физиологического варианта RCD, который способствует постэмбриональному развитию и обновлению тканей взрослого человека.1 4 Однако теперь стало ясно, что, по крайней мере, при определенных обстоятельствах индуцированный стрессом RCD может вызывать воспалительную реакцию, которая может завершиться активацией управляемого цитотоксическими Т-лимфоцитами (CTL) адаптивного иммунитета в сочетании с установлением долговременной иммунологической памяти.Такую функционально уникальную форму вызванного стрессом RCD теперь обычно называют иммуногенной гибелью клеток (ICD) 5. Клеточные стрессоры, связанные с МКБ, включают (но не ограничиваются ими): (1) облигатные внутриклеточные патогены, включая несколько видов бактерий и вирусов6–8; (2) терапевтические онколитические вирусы9–16; (3) различные молекулы с онколитическим потенциалом 17–19; (4) обычные химиотерапевтические препараты, такие как многочисленные антрациклины (например, доксорубицин, эпирубицин, идарубицин и митоксантрон), некоторые (но, что важно, не все) повреждающие ДНК агенты (например, циклофосфамид и оксалиплатин, но не цисплатин), поли-A-рибозополимераза (PARP) ингибиторы, митотические яды (например, доцетаксел и патупилон) и ингибиторы протеасомы (например, бортезомиб и карфилзомиб) 20-25; (5) эпигенетические модификаторы, включая ДНК-метилтрансферазу, гистондеацетилазу (HDAC) и ингибиторы бромодомена 26-30; (6) нацеленные противораковые агенты, такие как ингибитор тирозинкиназы кризотиниб, специфическое к рецептору эпидермального фактора роста (EGFR) моноклональное антитело цетуксимаб, ингибитор циклин-зависимой киназы (CDK) динациклиб и ингибитор тирозинкиназы Брутона (BTK31–33). ; (7) другие химические вещества, включая убиквитинспецифический ингибитор пептидазы спаутин-1, антибиотик блеомицин, ингибитор протеинфосфатазы-2A LB-100, компонент китайской фитотерапии шиконин и капсаицин 34–38 и (8) многочисленные физические вмешательства, включая различные формы ионизирующего излучения, экстракорпоральная фотохимиотерапия, фотодинамическая терапия на основе гиперицина (ФДТ), фотоиммунотерапия в ближнем инфракрасном диапазоне, высокое гидростатическое давление, тяжелый цитотоксический тепловой шок, наноимпульсная стимуляция и электрогипертермия.39–49 Важно отметить, что режимы доз и введения имеют большое влияние на способность многих из этих агентов инициировать продуктивную МКБ 50–52. Вышеупомянутые индукторы ICD сыграли важную роль не только для идентификации молекулярного механизма, лежащего в основе иммуногенности некоторых вариантов RCD, 5 но также для выяснения патофизиологических и терапевтических последствий этого процесса53. иммунитет не только имеет решающее значение для оптимального искоренения инфекционных патогенов, 54 но также влияет на цикл рака-иммунитета, изменяя баланс в сторону противоопухолевого иммунитета.55 В соответствии с этим представлением, как патогены, так и прогрессирующие опухоли используют стратегии, которые обеспечивают иммуноэвазию, избегая индукции ИКД.5 Более того, накопление клинических данных демонстрирует, что многочисленные индукторы ИКД, обычно используемые при лечении онкологических больных, взаимодействуют с иммунотерапией с блокаторами иммунных контрольных точек (ИКБ). при условии, что они не нарушают иммуностимулирующие сигналы или активность лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль.56 57 Морфологические особенности умирающих клеток и молекулярные механизмы, которые механически ответственны за гибель клеток, не обязательно коррелируют с иммуногенностью RCD.58 Таким образом, хотя конкретные случаи апоптоза, зависящего от каспазы 3 (CASP3), и некроптоза, зависимого от домена киназ смешанного происхождения (MLKL), инициируют адаптивный иммунитет в определенных экспериментальных условиях, 20 59 60 RCD, сопровождаемый активацией CASP3 или MLKL, не обязательно иммуногенный.61–63 Более того, хотя восприятие RCD как иммуногенного было этиологически связано с испусканием специфических сигналов от умирающих клеток (см. Определение гибели иммуногенных клеток ), наличие таких сигналов не обязательно является предиктором способности умирающих клеток для управления адаптивным иммунитетом in vivo.34 64 В целом эти наблюдения подчеркивают важность определения стандартизированных экспериментальных условий, которые позволяют оценивать МКБ в контексте надежной концептуальной основы для интерпретации результатов. Здесь мы даем общий обзор факторов, которые лежат в основе иммуногенности или RCD, и пытаемся предоставить такую основу, формулируя руководящие принципы для определения, обнаружения и интерпретации ICD. Номенклатурный комитет по клеточной смерти недавно определил МКБ как «форму RCD, достаточную для активации адаптивного иммунного ответа у иммунокомпетентных сингенных хозяев» 1, что правильно отражает два основных компонента ICD как процесс, то есть клеточный компонент и хост-компонент.Важно отметить, что последнее относится не к потенциальным дефектам хозяина, которые препятствуют инициации адаптивного иммунитета (например, несоответствие HLA, системный иммунодефицит), а к особенностям, присущим умирающим клеткам, которые делают их иммуногенными только у определенных хозяев. Действительно, способность RCD управлять адаптивным иммунитетом зависит от двух основных параметров, ни один из которых в конечном итоге не присущ умирающим клеткам: антигенность и адъювантность. Антигенность обеспечивается экспрессией и представлением антигенов, которые не могут индуцировать клональную делецию в контексте центральной толерантности у конкретного хозяина, что подразумевает, что хозяин содержит клоны наивных Т-клеток, которые могут распознавать такие антигены.65 66 Таким образом, здоровые клетки ограничены в своей способности управлять ICD, поскольку их антигены обычно экспрессируются эпителием тимуса во время развития Т-клеток. В качестве исключения некоторые наивные клоны Т-клеток, экспрессирующие аутореактивные низкоаффинные Т-клеточные рецепторы (TCR), избегают селекции тимуса, подразумевая, что такие антигены могут поддерживать ICD в контексте нарушения периферической толерантности (см. Источники антигенности ICD, ). Напротив, инфицированные клетки, а также злокачественные клетки проявляют достаточную антигенность для стимулирования иммунных ответов, поскольку они экспрессируют панель антигенных эпитопов, для которых обычно доступны наивные клоны Т-клеток.Эти антигенные детерминанты включают неоэпитопы, которые обладают высокой иммуногенностью, поскольку они не покрываются центральной толерантностью, а также (немутантные) эпитопы, которые могут быть иммуногенными из-за пробелов в центральной толерантности и / или неполной периферической толерантности.67 Адъювантность обеспечивается пространственно-временной скоординированное высвобождение или воздействие сигналов опасности, необходимых для набора и созревания антигенпрезентирующих клеток (APC), которые в совокупности называются молекулярными паттернами, связанными с повреждениями (DAMP).68 69 Хотя большинство (если не все) клетки содержат DAMP в количествах, достаточных для стимулирования мощной стимуляции APC, кинетика и интенсивность их высвобождения продиктованы внутриклеточными реакциями, управляемыми инициирующим стрессором. 70–72 Это может объяснить, почему некоторые цитотоксические вещества агенты могут управлять ICD, в то время как другие не могут, несмотря на их аналогичную способность вызывать RCD23 73 Условия микросреды также оказывают сильное влияние на склонность инфицированных или неопластических клеток, подвергающихся потенциально иммуногенному варианту RCD, инициировать адаптивный иммунитет и / или быть чувствительными к CTL-зависимому лизису, таким образом влияя как на фазу праймирования, так и на эффекторную фазу иммунологический ответ.Например, раковые клетки мышей, облученные in vitro, можно успешно использовать для иммунизации иммунокомпетентных сингенных мышей против последующего заражения живыми клетками того же типа, демонстрируя активацию иммунологической памяти.74 И наоборот, в терапевтических условиях иммуносупрессивное микроокружение, которое характеризует Большинство опухолей могут значительно ограничивать иммунитет, управляемый МКБ.75 76 Таким образом, облучение опухолевого поражения, установленного у иммунокомпетентных сингенных мышей, обычно не вызывает CTL-зависимый иммунный ответ достаточной силы для устранения отдаленного необлученного поражения, если только предусмотрены дополнительные иммуностимулирующие молекулы.77–79 В совокупности эти наблюдения предполагают, что, хотя адъювантность RCD зависит от умирающих клеток и способности инициирующего стрессора вызывать передачу сигналов об опасности, его иммуногенность в конечном итоге зависит от умирающих клеток и хозяина, что также определяет склонность умирающих клеток к управлять адаптивным иммунитетом на уровне микросреды (рисунок 1). Основные факторы, определяющие иммуногенность гибели клеток. Клетки, претерпевающие регулируемую клеточную смерть (RCD) в ответ на стресс, могут инициировать адаптивный иммунный ответ, специфичный для антигенов, связанных с мертвыми клетками, при условии, что (1) эти антигены не полностью покрываются центральной толерантностью, и (2) умирающие клетки испускают панель молекулярные паттерны, связанные с иммуностимулирующим повреждением (DAMP) и цитокины, которые при доставке в соответствии с точным пространственно-временным паттерном поддерживают рекрутинг, фагоцитарную активность и созревание антигенпрезентирующих клеток (APC), де-факто позволяя им поглощать антигенный материал, мигрировать в лимфатические узлы и запускают цитотоксический Т-лимфоцит (CTL) -зависимый иммунный ответ.Поскольку они экспрессируют опухолевые неоантигены (TNA, которые не покрываются центральной толерантностью) и / или ассоциированные с опухолью антигены (TAA, для которых центральная толерантность является негерметичной), раковые клетки могут претерпевать добросовестную иммуногенную гибель клеток (ICD) в ответ на выбор стимулы, включая (но не ограничиваясь ими) некоторые химиотерапевтические агенты, обычно применяемые в клинике, а также лучевую терапию. Однако TME обычно характеризуется иммуносупрессивным профилем, который может предотвращать либо инициирование, либо выполнение управляемого ICD противоопухолевого иммунитета.Таким образом, окончательная способность RCD управлять адаптивным иммунитетом зависит не только от инициирующего стимула и умирающей клетки, но также от свойств, присущих хозяину. IFNAR, рецептор интерферона-альфа / бета; PRR, рецептор распознавания образов; T REG , нормативный T; TME, микросреда опухоли. Заражение патогенными микробами является очевидным источником антигенных детерминант, поскольку микробные белки не покрываются центральной толерантностью и, следовательно, их эпитопы обладают высокой антигенностью.80 81 Вместе со способностью консервативных микробных продуктов, совокупно называемых микробами-ассоциированными молекулярными структурами (MAMP), передавать мощные иммуностимулирующие сигналы, это объясняет, почему RCD, управляемый внутриклеточными патогенами, является высоко иммуногенным. 82–84 То же самое обычно не относится к здоровые сингенные клетки, поскольку тимическая и периферическая толерантность приводят к удалению или функциональной инактивации самореактивных клонов Т-клеток из репертуара зрелых Т-клеток хозяина, 85 хотя некоторые наивные клоны Т-клеток, экспрессирующие аутореактивные низкоаффинные ТКО, могут избежать отбора тимуса и, следовательно, влечение (особенно в контексте утраты периферической толерантности) аутоиммунные реакции.86 Есть по крайней мере два исключения из этого принципа, которые могут лежать в основе способности здоровых клеток проходить ICD. Во-первых, геном нормальных клеток содержит значительное количество эндогенных ретровирусов, которые, как правило, являются латентными (т. Е. Не транскрибируются) в физиологических условиях.87 88 Однако в ответ на некоторые клеточные стрессоры эндогенные ретровирусы могут стать активированными и / или ретровирусными генами. могут быть экспрессированы, что приводит к синтезу потенциально антигенных белков.89 Во-вторых, антигенные детерминанты могут быть получены ферментативными или неферментативными посттрансляционными модификациями (PTM), которые изменяют структуру белка, включая (но, возможно, не ограничиваясь) фосфорилирование, ацетилирование, гликозилирование, цитруллинирование, нитрование / нитрозилирование, гликозилирование, окисление и др. убиквитинирование.90 Более того, репертуар антигенных пептидов может быть усилен за счет изменений в активации ретикулярных аминопептидаз, таких как аминопептидаза 1 эндоплазматического ретикулума (ERAP1) и ERAP2.91 Важно отметить, что каскады передачи сигналов, которые регулируют ферментативные PTMs, чувствительны к множеству сигналов микроокружения и не обязательно активируются сходным образом на периферии и в эпителии тимуса во время отбора клональных Т-клеток. Это означает, что некоторые PTM-содержащие эпитопы не могут быть охвачены центральной толерантностью. Аналогичным образом, условия микросреды, которые накладывают неферментативные ПТМ (например, окислительная внеклеточная среда), обычны в местах воспаления, ишемии или злокачественного прогрессирования, но не в тимусе.92 Следует отметить, что такие стрессовые условия также могут приводить к образованию антигенных пептидов, полученных в результате «скрытой» трансляции (т. Е. Из нетранслируемых мРНК) .93 В поддержку способности здоровых клеток управлять МКБ, по крайней мере, в некоторых условиях, PTM-зависимые эпитопы приписывают патогенное значение при некоторых аутоиммунных заболеваниях, включая диабет и ревматоидный артрит.94 95 Большинство опухолей человека не вызываются активными вирусными инфекциями. Тем не менее, как и умирающие клетки, инфицированные патогенами, злокачественные клетки могут проявлять высокую антигенность, что в значительной степени отражает повышенную скорость мутаций, которая часто сопровождает злокачественную трансформацию и прогрессирование заболевания в контексте иммуноэвазии.96 97 В некоторых случаях такие мутации вызывают иммунные реакции, поскольку они влияют на кодирующие области генома. Это случай несинонимичных точечных мутаций (т. Е. Мутаций, изменяющих аминокислотную последовательность), а также мутаций сдвига рамки считывания, вызванных небольшими вставками и делециями (инделениями) в белках, которые экспрессируются и должным образом обрабатываются механизмом презентации антигена, что приводит к воздействие опухолевых неоантигенов (ТНК). ТНК, экспонированные на поверхности злокачественных клеток, могут иметь плохую структурную гомологию с собственными эпитопами, поэтому частично напоминают микробные эпитопы и эффективно инициируют иммунные ответы de novo.75 98–101 Некоторые аутоантигены, экспрессируемые раковыми клетками, также могут инициировать противоопухолевый иммунитет. Поскольку они не являются уникальными для неопластических тканей, но также экспрессируются здоровыми или иммунопривилегированными тканями, такие антигены были названы антигенами, ассоциированными с опухолью (ТАА). TAA, которые, как было показано, управляют противоопухолевым иммунитетом, особенно в условиях терапевтической противоопухолевой вакцинации, 102 103 включают: (1) антигены тканевой дифференциации, такие как CD19, CD20, премеланосомный белок (PMEL, наиболее известный как gp100) и мелан-A (MLANA, наиболее известный как MART-1), а также (2) эктопически экспрессируемые белки, такие как карциноэмбриональные антигены (CEA), раковые / семенниковые антигены, а также множественные члены семейств белков MAGE и SSX.104–106 Центральная толерантность к этим антигенам непостоянна (это означает, что доступны наивные Т-клеточные клоны, экспрессирующие TCR с низким сродством), и периферическая толерантность может быть преодолена в контексте сильной адъювантности. 106–108 Таким образом, хотя TAA обычно слабее вызывая противоопухолевый иммунитет по сравнению с TNA, 109 они могут иметь отношение к ICD-управляемому иммунитету в опухолях с низкой нагрузкой TNA. Следует отметить, что суровые условия, которые характеризуют микроокружение опухоли (TME), и обширная перестройка передачи сигнала, которая характерна для злокачественных клеток, предполагают, что PTM могут играть преобладающую роль в определении антигенности раковых клеток, возможность, которая остается в значительной степени неизученной.110 Несколько факторов влияют на антигенность опухолей, развивающихся у иммунокомпетентных сингенных хозяев. Во-первых, мутационная нагрузка (и, следовательно, возможность генерирования TNA) неоднородна в пределах опухолей и внутри них и варьируется от ~ 1 мутации на Мб при гематологических злокачественных новообразованиях до> 10 мутаций на Мб в солидных опухолях с гипермутантным фенотипом111–113 Мутационная нагрузка. и ландшафт TNA также развивается в пространстве (то есть в отдельных областях опухоли) и во времени (то есть на разных стадиях злокачественного прогрессирования) под давлением постоянного иммунитета и в ответ на усиление геномной нестабильности, а также химиотерапевтические или радиотерапевтические вмешательства, 97 114 115 приводя к опухолям или областям опухоли с отчетливой антигенностью и, следовательно, с различной способностью управлять адаптивными иммунными ответами на RCD.116 При этом, хотя мутационная нагрузка была связана с чувствительностью множественных опухолей к ICB 117–119, а опухоли с обширной иммунной инфильтрацией (которые часто являются генетически нестабильными) характеризуются транскрипционной сигнатурой ICD, 120 формальная демонстрация того, что мутационная нагрузка также влияет на противоопухолевые эффекты терапевтических схем на основе ИКД в клинике отсутствуют. Доклинические данные свидетельствуют о том, что даже клетки с пониженной мутационной нагрузкой могут управлять адаптивным иммунитетом, 121 хотя ожидается, что выбор экспериментальной модели будет играть важную роль в этом контексте (см. Выявление МКБ при раке ).Во-вторых, антигенность злокачественных клеток напрямую связана с презентацией антигена, подразумевая, что генетические и эпигенетические дефекты, которые ставят под угрозу ее, могут быть полезны для раковых клеток.122 123 Эти дефекты, которые часто встречаются в опухолях с высокой мутационной нагрузкой и устойчивой инфильтрацией Т-клеток, 124 125 включают: (1) потерю антигена и субклональную эволюцию, то есть преимущественное разрастание клонов раковых клеток, которые не экспрессируют антиген, подверженный активному иммунитету114, и (2) нарушение презентации антигена в результате мутаций, дерегулированной экспрессии или структурные изменения ключевых компонентов антиген-презентирующего аппарата, включая молекулы MHC класса I, бета-2-микроглобулин (B2M), транспортер 1, член подсемейства B АТФ-связывающей кассеты (TAP1), TAP2 и протеасомные субъединицы.125 126 Следует отметить, что, хотя считается, что большинство индукторов ИКБ оказывают незначительное влияние на антигенность и действуют, управляя правильным пространственно-временным выбросом DAMP в контексте гибели клеток (см. Источники адъювантности МКБ, ), по крайней мере, некоторые МКБ Режимы запуска могут также повысить антигенность. Это относится к потенциально мутагенным агентам и вмешательствам, которые вызывают реактивацию эндогенных ретровирусов и / или вызывают экспрессию мутированных генов или TAA, таких как ингибиторы CDK4 / CDK6, 127 ионизирующее излучение, 79 128 ингибиторов ответа на повреждение ДНК (DDR), 129 130 онколитических вирусов131 или ингибиторов HDAC и других эпигенетических регуляторов.132–134 Независимо от этой возможности, способность RCD управлять адаптивным иммунитетом тесно зависит от антигенности умирающих клеток в отношении доступности и функционального статуса репертуара зрелых TCR хозяина. ICD, управляемый микробными патогенами, вероятно, связан с наиболее мощными сигналами адъюванта для организмов млекопитающих, MAMPs. MAMP включают в себя множество микробных продуктов, которые действуют как внутри инфицированных клеток, так и в их микроокружении, чтобы управлять набором и созреванием APC, что завершается (перекрестной) презентацией антигена наивным Т-клеткам.MAMP включают виды микробных нуклеиновых кислот (например, вирусные одноцепочечные или двухцепочечные РНК или ДНК, бактериальные CpG-богатые ДНК), а также структурные компоненты (например, липополисахарид, пептидогликаны, флагеллин) и в основном опосредуют иммуностимулирующие эффекты через распознавание образов. рецепторов (PRR) .82 83 Последние включают многочисленные Toll-подобные рецепторы (TLR), экспрессируемые на поверхности клетки и в эндосомных компартментах, 135–138, а также (1) циклическую GMP-AMP-синтазу (CGAS), сенсор цитозольного двухцепочечная ДНК (дцДНК) 139; (2) RIG-I-подобные рецепторы (RLR), группа РНК-специфичных PRR, названных в честь DExD / H-бокс-геликазы 58 (DDX58, наиболее известной как RIG-I) 140 141; (3) NOD-подобные рецепторы (NLR), семейство PRR с широкой лигандной специфичностью, названное в честь общего нуклеотид-связывающего домена олигомеризации (NOD) 142 143; (4) Z-ДНК-связывающий белок 1 (ZBP1), сенсор нуклеиновой кислоты, также известный как DAI, точный механизм активации которого остается неизвестным144; (5) гетерогенный ядерный рибонуклеопротеин A2 / B1 (HNRNPA2B1), сенсор вирусной ядерной ДНК и РНК, несущих N6-метиладенозин.145 146 PRR стимулируют выработку множества иммуностимулирующих средств, которые являются ключевыми для контроля патогенов иммунной системой147. Те же самые PRR, активированные MAMP, также участвуют в адъювантности ICD, индуцированной в раковых клетках немикробными стимулами.68 148 Таким образом, злокачественные клетки, подвергшиеся воздействию потенциально иммуногенного индуктора RCD, испускают многочисленные DAMP и цитокины, которые были механистически связаны с инициирование адаптивного иммунитета на доклинических моделях (таблица 1). Эти иммуностимулирующие молекулы включают (но, скорее всего, не ограничиваются ими): АТФ, 149 150 клеточных нуклеиновых кислот, 151 152 негистоновые, ядерный ДНК-связывающий белок с высокой подвижностью, блок 1 группы (HMGB1), 153–156 член группы суперсемейство аннексинов аннексин A1 (ANXA1), 157 цитокинов, таких как интерферон I типа (IFN), хемокиновый лиганд 2 с мотивом CC (CCL2), хемокиновый лиганд 1 с мотивом CXC (CXCL1) и шапероны CXCL10,151 158 159 ER, такие как кальретикулин (CALR), белок член 3 семейства дисульфидизомераз A (PDIA3, также известный как ERp57), член 1A семейства белков теплового шока A (Hsp70) (HSPA1A, наиболее известный как HSP70), член 1 класса A семейства Hsp90 альфа (HSP90AA1, наиболее известный как HSP90), 21 22 160 цитозольные компоненты, такие как F-актин, 161 и другие митохондриальные продукты, такие как ДНК, активные формы кислорода (ROS), кардиолипин и фактор транскрипции A, митохондрии (TFAM).36 162–164 Основными функциями ICD-ассоциированных DAMP и цитокинов являются: (1) обеспечение рекрутирования APC или их предшественников в сайты RCD (например, ATP) 149 150 165, (2) пространственное управление взаимодействием между APC. и умирающие клетки (например, ANXA1) 157, (3) способствуют фагоцитозу умирающих клеток или их трупов (например, CALR, ERp57, HSP70, HSP90, F-actin) 21 22 160 161, (4) способствуют созреванию APC и их способность влиять на перекрестную презентацию (например, АТФ, HMGB1, IFN типа I и TFAM), 149, 153, 166–168 и (5), способствуют привлечению Т-клеток (например, CCL2, CXCL1 и CXCL10).151 158 Следует отметить, что некоторые выделяемые DAMP являются иммуносупрессивными (например, аденозин), 169 в то время как другие могут переключаться на противовоспалительные в зависимости от задействованного PRR (например, HMGB1), биохимических модификаций, таких как окисление (например, HMGB1) или хроническое высвобождение ( например, IFN типа I) .53 70 170 В самом деле, хотя острые, устойчивые воспалительные реакции, такие как вызванные ICD, в конечном итоге вызывают противоопухолевый иммунитет, вялотекущее хроническое воспаление неизменно связано с иммуноэвазией и прогрессированием опухоли.171 Следует отметить, что выделение ДАМФ умирающими клетками происходит в контексте неэффективных внутриклеточных реакций на стресс, которые передают сигналы опасности остальному организму для сохранения системного гомеостаза.172 Это означает, что дефекты множества механизмов, поддерживающих клеточную адаптацию к стрессу, могут способствовать гибели клеток, но в то же время могут поставить под угрозу способность умирающих клеток инициировать адаптивный иммунитет как следствие ограниченной адъювантности. Основные иммуностимулирующие DAMP и цитокины, механистически связанные с ICD при раке Макроаутофагия (здесь именуемая аутофагией) — это цитопротективный лизосомный путь деградации избыточного или потенциально опасного цитозольного материала и органелл.173–176 Убедительные доказательства указывают на то, что аутофагия необходима для сохранения лизосомальных запасов АТФ в ходе большинства (но не всех) вариантов МКБ.149 166 Как следствие клеточного пузыря, который опосредуется мембранным белком, ассоциированным с лизосомами 1. (LAMP1) и паннексин 1 (PANX1), АТФ высвобождается во внеклеточное пространство.165 177 В качестве альтернативы, связанное с МКБ высвобождение АТФ может происходить посредством антероградного транспорта ER-to-Golgi.178 Внеклеточный АТФ проявляет свою адъювантность путем связывания к пуринергическому рецептору P2Y2 (P2RY2), который способствует рекрутированию APC и их предшественников, и пуринергическому рецептору P2X7 (P2RX7), который способствует их активации и последующему высвобождению иммуностимулирующего цитокина интерлейкина (IL) -1β.149 150 179 Интегрированный стрессовый ответ (ISR), многоплановый молекулярный механизм для сохранения клеточного гомеостаза, необходим для воздействия шаперонов ER на клеточную поверхность во время МКБ.46 180–182 В частности, стресс ER, вызванный антрациклинами, стимулирует инактивирующие фосфорилирование эукариотической субъединицы фактора инициации трансляции 2 альфа (EIF2S1, наиболее известный как eIF2α) эукариотическим фактором инициации трансляции 2 альфа-киназой 3 (EIF2AK3, наиболее известный как PERK) 183, достигая высшей точки в белке 31, ассоциированном с CASP8- и В-клеточными рецепторами (BCAP31 ) -зависимая транслокация шаперонов ER к наружному листку плазматической мембраны.160 178 180 Для большинства индукторов ICD весь процесс также основан на антероградном транспорте ER-to-Golgi, опосредованном ассоциированным с пузырьками мембранным белком 1 (VAMP1) и ассоциированным с синаптосомами белком 25 (SNAP25) 53 180 184 и требует сопутствующей продукции ROS.71 Следует отметить, что связанное с ICD воздействие некоторых шаперонов ER (в частности, CALR) на клеточную поверхность, по-видимому, регулируется хемокиновым лигандом 8 (CXCL8) мотива CXC, 184 ER Ca 2+ уровней, 185 также как CASP2, длинные некодирующие РНК (например, ncRNA-RB1 и miR-27a) и интегрины плазматической мембраны, по крайней мере, в некоторых случаях.186–189 Воздействие на поверхность CALR (и других шаперонов ER) способствует поглощению умирающих клеток или их трупов APC, по крайней мере, в некоторых условиях при взаимодействии с белком 1, связанным с рецептором ЛПНП (LRP1) .178 190 Более того, воздействие CALR, по-видимому, способствует управляет секрецией IFN типа I с помощью APC, 191 192, что, как ожидается, также вносит вклад в иммуногенность RCD. Механизмы сохранения клеточного гомеостаза в ответ на инфекцию также непосредственно участвуют в адъювантности ИКД, даже если последняя не управляется микробами.193 Действительно, множественные нуклеиновые кислоты эндогенного происхождения могут быть обнаружены с помощью PRR, чтобы инициировать передачу сигналов опасности, как правило, на основе эктопической локализации или структурных модификаций, которые возникают во время стрессовых реакций.135 Таким образом, управляемая химиотерапией ICD включает активацию TLR3 эндогенными видами РНК, приводя к секреции IFN типа I и последующему инициированию аутокринной петли, которая завершается высвобождением CXCL10158. Аналогично подобным линиям, раковые клетки поддаются ионизирующему излучению, поскольку они продуцируют IFN типа I ниже по ходу передачи сигналов CGAS, управляемых цитозольной дцДНК.194 195 Связываясь со своим родственным рецептором, IFN типа I опосредует сильные иммуностимулирующие эффекты как на APC, так и на эффекторные клетки.196 Он также запускает продукцию IFN-стимулированных генов (ISG), таких как CXCL10. Затем CXCL10 действует как хемоаттрактант для Т-клеток и вместе с CXCL1 и CCL2 для нейтрофилов, которые (по крайней мере, в некоторых условиях), по-видимому, способствуют управляемому ICD уничтожению остаточных раковых клеток антиген-независимым образом151, 158 Следует отметить, что нуклеиновые кислоты, полученные из раковых клеток, также могут опосредовать иммуностимулирующие эффекты, управляя секрецией IFN типа I в APC, как правило, при переносе внеклеточных микровезикул, содержащих нуклеиновую кислоту, между этими двумя клеточными компартментами.195 197 Точные реакции на стресс, связанные с высвобождением других ICD-ассоциированных DAMP, включая ANXA1 и HMGB1, еще предстоит полностью выяснить. Независимо от этого неизвестного, известно, что ANXA1 пространственно направляет APC к умирающим клеткам при взаимодействии с рецептором формилпептида 1 (FPR1), 157, в то время как HMGB1 может опосредовать надежные иммуностимулирующие функции путем передачи сигналов через специфический рецептор конечного продукта гликозилирования (AGER, также известный как RAGE) и TLR4,153 154 167 198–200 — активность, которая, по-видимому, зависит от состояния окисления.201 202 Более того, стало ясно, что молекулярный аппарат, участвующий в ICD-ассоциированной эмиссии DAMP, демонстрирует некоторую степень вариации в зависимости от индуктора ICD и типа клетки. Таким образом, воздействие CALR и секреция АТФ необходимы для полноценной иммуногенности раковых клеток, уступающих ФДТ на основе гиперицина, но это может происходить независимо от фосфорилирования eIF2α и активации аутофагии. АТФ и HMGB1, но CALR экспонируется на плазматической мембране на низких уровнях, и активация ISR, по-видимому, не требуется.59 204 Критическая роль передачи сигналов DAMP в иммуногенности RCD была установлена множеством дополнительных механистических экспериментов, направленных на: (1) фармакологическое или генетическое ингибирование сигнальных путей, участвующих в высвобождении DAMP (например, с раковыми клетками, экспрессирующими нефосфорилируемый вариант eIF2α) 180; (2) искусственная активация стрессовых ответов, ответственных за выброс DAMP (например, со стрессорами ER в неопластических клетках, подвергающихся варианту RCD, иначе не связанного с активацией ISR) 205 206; (3) нокаут или нокдаун генов, кодирующих DAMP (например, в раковых клетках, лишенных HMGB1 за счет РНК-интерференции) 23 153; (4) нейтрализация / блокада DAMP (например, клетками, сверхэкспрессирующими внутриклеточный фермент, разрушающий цитозольную дцДНК) 194; (5) экзогенная комплементация DAMP (например, с рекомбинантным CALR, вводимым в клетки, подвергающиеся RCD в отсутствие воздействия CALR) 22 180 207 208; (6) усиление антагонистических процессов (например, раковых клеток, сверхэкспрессирующих антифагоцитарную молекулу CD47) 209 210; (7) блокада рецепторов DAMP (например, с помощью моноклональных антител, специфичных для рецепторов IFN типа I) 158 и (8) нокаут или нокдаун генов, кодирующих рецепторы DAMP в хозяине (например, с помощью Fpr1 — / — мышей).157 Несколько линий клинических данных также предполагают, что умелая сигнализация об опасности имеет решающее значение для онкологических больных для получения клинической пользы от терапии, индуцирующей ИКД.211 Эти результаты обычно относятся к прогностической или прогностической ценности (1) активации стрессовых реакций, влияющих на выброс DAMP. в раковых клетках (например, фосфорилирование eIF2α в сочетании с высокими уровнями CALR в биоптатах пациентов с немелкоклеточным раком легкого) 212; (2) уровни экспрессии специфических DAMP (например, уровни HMGB1 в биоптатах пациентов с раком груди, подвергшихся адъювантной химиотерапии на основе антрациклинов) 213 214; (3) Эмиссия DAMP раковыми клетками (например, воздействие CALR на бласты у пациентов с острым миелоидным лейкозом) 215 216; (4) фактическая передача сигналов опасности в TME (например, генные сигнатуры передачи сигналов IFN типа I у субъектов с раком груди) 217; (5) полиморфизм потери функции в генах, кодирующих рецепторы DAMP (например, P2R × 7 , TLR4 и FPR1 полиморфизмов у пациентов с карциномой груди, получающих неоадъювантные антрациклины) 23 150 153 157 и (6) уровни экспрессии антагонистов DAMP (например, экспрессия CD47 на раковых клетках у пациентов с острым миелоидным лейкозом, плоскоклеточный рак пищевода и светлоклеточный рак яичников).218–220 Это лишь несколько примеров, подтверждающих важность передачи сигналов DAMP для того, чтобы RCD воспринимался как иммуногенный у пациентов. Хотя некоторые ткани реагируют на патогенную инфекцию более устойчиво, чем другие (что отражает различную численность резидентных в тканях APC), клетки, погибающие от микробной инфекции, обычно вызывают адаптивный иммунитет независимо от анатомического расположения221. гибели раковых клеток является основным фактором, определяющим их способность инициировать адаптивные иммунные ответы, даже при наличии достаточной антигенности и адъювантности, 5 222, и это имеет большое значение для выбора экспериментальных моделей для оценки ICD in vivo (см. In vivo модели ). Существует несколько механизмов, посредством которых микросреда развивающихся опухолей может противодействовать инициированию или выполнению ICD, в значительной степени отражая способность различных новообразований устанавливать периферическую толерантность. Так называемые «холодные» и «исключенные» опухоли плохо инфильтрируются иммунными клетками, включая APC и их предшественники, на исходном уровне, что означает, что вероятность продуктивной обработки умирающих раковых клеток и их трупов и их перекрестного прайминга снижается. Прайминг также ограничивается коингибиторными рецепторами, экспрессируемыми Т-клетками, инфильтрирующими опухоль, включая CTL-ассоциированный белок 4 (CTLA4) и клеточный рецептор 2 вируса гепатита А (HAVCR2, наиболее известный как TIM-3), гликопротеин, который связывается с HMGB1, а также сигнал «съешь меня» — фосфатидилсерин на поверхности умирающих клеток.152 225 Более того, активность APC, инфильтрирующих злокачественные образования, обычно ингибируется иммуносупрессивными цитокинами, включая (но не ограничиваясь) IL-10 и трансформирующий фактор роста бета 1 (TGFB1) .226 227 Эти биологически активные факторы в большом количестве вырабатываются в ответ на гипоксию. и во время хронического воспаления, и надежно связаны с иммуноэвазией и прогрессированием опухоли.228 IL-10 и TGFB1 секретируются раковыми клетками и иммуносупрессивными иммунными клетками, активно рекрутируемыми в TME, такими как CD4 + CD25 + FOXP3 + регуляторных T (T REG ) клеток, M2-поляризованных опухоль-ассоциированных макрофагов (TAM) и / или супрессорных клеток миелоидного происхождения (MDSC).229–231 Важно отметить, что эти популяции иммунных клеток экспрессируют высокие уровни эктонуклеозидтрифосфатдифосфогидролазы 1 (ENTPD1, наиболее известная как CD39) и экто 5′-нуклеотидазы (NT5E, наиболее известная как CD73), 232–234 двух ферментов, которые взаимодействуют для преобразования внеклеточных АТФ в аденозин, который также обеспечивает устойчивые иммуносупрессивные эффекты. 235 Таким образом, клетки T REG , M2-поляризованные ТАМ и MDSC также оказывают прямое антагонистическое действие на ICD. Редокс-статус TME и отдельных DAMP или их рецепторов также может влиять на способность RCD управлять адаптивным противораковым иммунитетом.Например, высвобождение окисленного HMGB1 раковыми клетками, подвергающимися пироптозу, гассдермин-зависимой форме RCD, обычно связанной с активацией инфламмасом, 1 ограничивает противораковый иммунитет, поскольку он способствует экспрессии коингибиторных лигандов.236 Напротив, окисленная митохондриальная ДНК способствует активации инфламмасом. и, следовательно, секреция иммуностимулирующих факторов, таких как IL-1β, в TME, 237 хотя фактическое патологическое значение этого пути остается неизвестным. Другой важный механизм прогрессирования опухолей, позволяющий избежать ИКД на этапе выполнения (т.е. способность ЦТЛ, управляемых ИКД, опосредовать цитотоксические эффекты), зависит от иммунного истощения, то есть установления дисфункции Т-лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль.238–241 Коингибирующие рецепторы, включая запрограммированную гибель клеток 1 (PDCD1, также известный как PD-1), являются основными (но не единственными) участниками в этой обстановке. Действительно, активированные CTL имеют повышенные метаболические потребности, и как глюкоза, так и аминокислоты обычно ограничены в TME.242 243 Более того, некоторые иммуносупрессивные метаболиты, которые обогащены TME, помимо аденозина, такие как кинуренин и лактат, 244 245 и цитокин-зависимые. иммуносупрессия также действует на CTL.224 246 247 Наконец, сосудистые дефекты и реакция плотной стромы, которые характерны для некоторых опухолей (например, рака поджелудочной железы), могут составлять физический барьер для инфильтрации опухоли CTL, перекрестно праймированных в лимфатических узлах, дренирующих опухоль, 248 249 де-факто препятствует выполнению этапа ICD.Помимо иллюстрации критической важности местного микроокружения для иммуногенности RCD, эти наблюдения объясняют, почему одни и те же раковые клетки, получающие одни и те же индукторы ICD in vitro и in vivo, могут различаться по своей способности инициировать адаптивный иммунитет. Важно отметить, что несколько терапевтических средств, индуцирующих ИКД, а также различные методы лечения, не способствующие развитию ИКД, могут опосредовать иммуномодулирующие эффекты на TME, напрямую взаимодействуя с популяциями иммунных клеток (а не с раковыми клетками).73 Хотя такие иммуномодулирующие эффекты важны для максимальной эффективности терапии у пациентов, они концептуально и механистически не связаны с индукцией ИКД и поэтому не будут здесь обсуждаться далее. За последние два десятилетия интенсивная волна исследований раскрыла основные механистические и корреляционные аспекты МКБ как процесса, кульминацией которого является активация адаптивного иммунитета против умирающих клеток. Экспериментальные стратегии, разработанные для оценки иммуногенности RCD, включают: (1) исследование эмиссии DAMP умирающими клетками (и активации соответствующих стрессовых реакций в); (2) биохимические и функциональные тесты для оценки активации APC и их способности опосредовать перекрестное праймирование in vitro и (3) способность умирающих клеток инициировать адаптивный иммунитет in vivo у иммунокомпетентных сингенных хозяев.Здесь мы кратко изложим современные методы оценки ICD в онкологических условиях. Надежные экспериментальные данные показывают, что способность RCD стимулировать адаптивный иммунитет критически зависит от прогрессирующего (но не исчерпанного) ответа CTL.121 Предположительно, это отражает необходимость наличия одного или нескольких TNA / TAA выше определенного порога в сочетании со своевременной доставкой сигналов опасности (которые, вероятно, будут варьироваться в зависимости от индуктора RCD и типа опухолевых клеток).Таким образом, в то время как раковые клетки мыши, подвергшиеся воздействию сердечных гликозидов, выделяют ICD-ассоциированные DAMP, они не могут инициировать защитный противораковый иммунитет после прививки иммунокомпетентным сингенным хозяевам, поскольку цитотоксичность ограничена и опухоли развиваются в местах вакцинации250. быстрая гибель клеток сочетается с массивным высвобождением TNA / TAA, но раковые клетки мыши, подвергнутые этой жесткой процедуре, не могут быть использованы для защиты сингенных иммунокомпетентных хозяев от последующего заражения живыми клетками того же типа, скорее всего, из-за неоптимальной адъювантности.20 59 Цитотоксический ответ, вызываемый индукторами ИКД, классически оценивался по биомаркерам терминальной гибели клеток, таким как проницаемость плазматической мембраны, а также по обычным биомаркерам апоптоза, включая воздействие фосфатидилсерина, диссипацию митохондриального трансмембранного потенциала и активацию инициатора или эффектора каспазы148 Обоснование и принципы этих анализов были подробно описаны нами и другими, 58 251 252 и, следовательно, не будут здесь обсуждаться далее. Тем не менее, существование вариантов ICD, основанных на некроптозном аппарате и / или возникающих независимо от активации каспаз1 59, 61, указывает на потребность в инструментах для измерения индукции ICD, которые могут учитывать все потенциально важные пути RCD. Внутриклеточные реакции на стресс, механически участвующий в высвобождении DAMP, также использовались в качестве суррогатных биомаркеров ICD. Активация ISR обычно отслеживается в трех его ретикулярных компонентах путем оценки фосфорилирования eIF2α, сплайсинга X-box-связывающего белка 1 (XBP1) и активации транслокации ядер транскрипционного фактора 6 (ATF6), в некоторых случаях вместе с белками теплового шока семейства A ( Hsp70) член 5 (HSPA5, также известный как GRP78) активная регуляция. Эти биомаркеры обнаруживаются с помощью иммуноблоттинга, проточной цитометрии, иммунофлуоресцентной микроскопии, иммуногистохимии и / или ОТ-ПЦР с использованием специальных антител или зондов.33 183 253 Связанная с ICD активация PRR в раковых клетках классически измерялась иммуноблоттингом с антителами, специфичными для ключевых фосфорилированных трансдукторов, таких как фосфорилированный регуляторный фактор 3 IFN (IRF3) ниже передачи сигналов CGAS, 254 255 или с помощью люминесцентных репортеров на основе транскрипции. 254 256–258 В качестве альтернативного подхода отслеживалось эктопическое накопление нуклеиновых кислот, как правило, с помощью иммунофлуоресцентной микроскопии со специальными антителами или путем субклеточного фракционирования в сочетании с необязательным ферментативным расщеплением нуклеиновых кислот и количественным определением на основе поглощения.158 256 Активация аутофагии в клетках, подвергшихся действию потенциальных индукторов ИКД, в значительной степени отслеживалась сопутствующей оценкой липидирования легкой цепи 3 белка 1, ассоциированного с микротрубочками (MAP1LC3, наиболее известный как LC3) и деградации аутофагического субстрата, такого как секвестосома 1 (SQSTM1, также известный как p62) с помощью иммуноблоттинга в контексте соответствующих контрольных условий.259 Аутофагия действительно является динамическим процессом, и простой анализ липидирования LC3 в клетках, отвечающих на стрессовые условия, не может быть использован для различения между активацией аутофагии и ингибированием.259 Экспозиция на клеточной поверхности шаперонов ER в качестве суррогатного биомаркера ICD может быть определена (1) проточной цитометрией в непроницаемых клетках раннего апоптоза с использованием специфических антител или специальных конструкций (например, CALR, слитого с HaloTag) в сочетании с жизненно важными красителями, такими как 7-аминоактиномицин D (7-AAD), 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндол (DAPI) или иодид пропидия (PI), которые позволяют исключить мертвые клетки из анализа41 180 205 260; (2) флуоресцентная микроскопия в клетках, фиксированных низкой концентрацией параформальдегида, а затем иммуноокрашенных антителами, специфичными для шаперонов ER21 32 43 160 261; (3) флуоресцентная микроскопия или видеомикроскопия в клетках, конститутивно экспрессирующих конструкцию, в которой выбранный шаперон ER слит с GFP или другой флуоресцентной меткой 33 205 250 262 и (4) иммуноблоттинг в клетках, ранее подвергнутых биотинилированию белков клеточной поверхности с последующим путем осаждения, опосредованного стрептавидином.160 263 Два основных подхода были использованы для определения высвобождения растворимых DAMP, связанных с ICD, и цитокинов из умирающих клеток: (1) количественное определение DAMP / цитокинов в культуральных супернатантах и (2) количественное определение остаточных DAMP / цитокинов во внутриклеточном микроокружении. Следует отметить, что, хотя первый подход универсален, последний не может быть использован для DAMP и цитокинов, которые активно синтезируются перед высвобождением, таких как IFN типа I и CXCL10.148 Таким образом, внеклеточный и внутриклеточный АТФ можно количественно оценить с помощью коммерческой люминесценции. анализы супернатантов культур и клеточных лизатов соответственно.149 150 178 264 Внеклеточный АТФ и продукты его распада (АДФ, АМФ и аденозин) также можно количественно определить с помощью целевой масс-спектрометрии, 149 в то время как его внутриклеточный аналог можно контролировать с помощью проточной цитометрии или флуоресцентной микроскопии на окрашивание АТФ-специфическим красителем хинакрином или реализация репортеров на основе АТФ-специфического флуоресцентного резонансного переноса энергии (FRET). 165 265 Наконец, секреция ANXA1, HMGB1, IFN типа I и CXCL10 клетками, подвергающимися RCD, классически контролировалась коммерческим ELISA или иммуноблоттингом на супернатантах культур или клеточных лизатах.32 151 153 157 158 266 Кроме того, доступна флуоресцентная версия HGMB1, которая позволяет оценить высвобождение HMGB1 с помощью флуоресцентной микроскопии или видеомикроскопии в зависимости от остаточной флуоресценции клеток. 33 42 250 267 Следует отметить, что обычно применяется ОТ-ПЦР. используемый для мониторинга IFN типа I и CXCL10,158 268, этот подход де-факто измеряет передачу сигналов PRR, поскольку транскрипция не обязательно связана с трансляцией и секрецией. В то время как внутриклеточные реакции на стресс и выброс DAMP можно одинаково контролировать на моделях опухолей у мышей и человека, исследования in vivo в настоящее время можно проводить только в первых (см. In vivo модели ).Чтобы частично обойти эту проблему и дать возможность функциональной оценки иммуногенности RCD как в системе мыши, так и в организме человека, специалисты в этой области позаимствовали несколько классических анализов из иммунологии. В целом, эти эксперименты направлены на оценку того, могут ли умирающие раковые клетки стимулировать способность APC оптимально перекрестно праймировать CTL и, следовательно, инициировать адаптивный иммунный ответ. В частности, APC человека или мыши, подвергнутые воздействию умирающих раковых клеток человека или мыши, соответственно, часто исследуются на предмет: (1) их способности поглощать умирающие клетки или их трупы; (2) их статус созревания и миграционная способность и (3) их способность перекрестно презентировать антигенный материал CTL.Фагоцитоз часто оценивают путем совместного культивирования APC или их предшественников и умирающих раковых клеток при индивидуальной предварительной маркировке обоих отделов различными нетоксичными флуоресцентными красителями, которые остаются в цитоплазме, такими как сукцинимидиловый эфир карбоксифлуоресцеина (CFSE) или PKh36, с последующей флуоресцентной микроскопией или проточной микроскопией. цитометрия.32 269 270 В качестве альтернативы предварительно метят только раковые клетки, а фагоцитоз отслеживают при окрашивании сокультуры моноклональными антителами, специфичными для выбранных APC.264 266 Кроме того, поглощение апоптозными клетками было измерено путем внутривенного введения предварительно меченых умирающих раковых клеток мыши с последующим выделением спленоцитов и проточной цитометрией. 268 270 Статус созревания APC классически измеряли с помощью проточной цитометрии при окрашивании сокультуры клеток с помощью антитела, специфичные к молекулам MHC класса II и костимулирующим молекулам, включая CD80, CD83 и CD86 (все они активируются во время созревания) .21 43 263 271 В качестве альтернативного или дополнительного подхода функциональное созревание контролировалось путем обнаружения цитокинов, секретируемых в культуральных супернатантах. посредством APC, приобретающих иммуностимулирующий фенотип, включая (но не ограничиваясь) IL-1β, IL-6, IL-12 и IL-23.41 150 263 ELISA и проточная цитометрия по внутриклеточному окрашиванию специальными антителами остаются методами выбора для последней стратегии. Тем не менее, для внутриклеточной оценки IL-1β требуется антитело, направленное против полностью зрелого варианта белка, поскольку его предшественник не секретируется.272 273 Была оценена миграционная способность (которая отражает способность умирающих клеток секретировать хемотаксические факторы). с помощью тестов Transwell 274–275 или с помощью специальных микрофлюидных устройств, которые позволяют проводить видеомикроскопию (если клетки предварительно помечены флуоресцентными красителями).157 276 Потенциал перекрестного прайминга APC, подвергнутых воздействию раковых клеток, подвергающихся RCD, чаще всего оценивался путем совместного культивирования с сингенными, наивными Т-клетками с последующей оценкой: (1) пролиферативного ответа Т-клеток, как правило, с помощью проточной цитометрии на предыдущем этапе. маркировка CFSE271 277; (2) статус активации Т-клеток, чаще всего с помощью проточной цитометрии при окрашивании моноклональными антителами, специфичными для поверхностных белков, связанных с активацией (например, CD69, LAMP1, PD-1) 150 153 278; (3) Функциональный профиль Т-клеток, либо с помощью проточной цитометрии при внутриклеточном окрашивании моноклональными антителами, специфичными для эффекторных молекул, таких как IFN-γ, перфорин 1 (PRF1) и гранзим B (GZMB), либо путем количественного определения внеклеточного IFN-γ с помощью ELISPOT.21 41268 278 Наконец, функции цитотоксических Т-клеток при перекрестном праймировании могут быть проверены путем измерения лизиса живых раковых клеток того же типа, что и для пульсации APC 46 279 280 или путем анализа ответа на специфические TAA 281 282 В настоящее время доступно лишь несколько моделей для исследования ICD in vivo (рисунок 2). Подход «золотой стандарт» для оценки способности умирающих клеток инициировать адаптивный иммунитет включает тесты вакцинации на иммунокомпетентных сингенных мышах.148 В этом контексте раковые клетки мыши подвергаются действию потенциального индуктора МКБ in vitro и затем вводятся в качестве вакцины sc . В отсутствие какого-либо иммунологического адъюванта и после удаления экзогенных химических образований (если таковые имеются, таких как Сам индуктор ICD). Через одну-две недели мышей заражают s.c . с живыми раковыми клетками того же типа (в минимальной дозе, которая на 100% эффективна для создания прогрессирующих поражений у наивных мышей) и наблюдали в течение 40–60 дней для выявления случаев и роста опухоли.20 22 153 178 208 Не только процент мышей без опухолей, но и скорость роста опухолей, потенциально развивающихся, несмотря на индуцированный вакциной адаптивный иммунный ответ, обычно используются в качестве индикаторов (по крайней мере, некоторой) степени иммуногенности. Специфичность подтверждается повторным заражением мышей без опухолей в конце эксперимента другой линией сингенных раковых клеток, которая, как ожидается, будет вызывать прогрессирующие неопластические поражения у 100% мышей. Следует отметить, что вакцинацию также можно проводить с помощью APC, подвергнутых воздействию умирающих раковых клеток in vitro, или проводить в терапевтических (а не профилактических) условиях, то есть как лечение установленных опухолей.157 283–285 Более того, CD8 + Т-клетки, перекрестно праймированные in vitro APC, подвергнутыми воздействию раковых клеток, подвергающихся ICD, были использованы в экспериментах по адаптивному переносу для лечения опухолей, ранее созданных с помощью живых раковых клеток того же типа32 286. сравнение эффективности любого индуктора RCD против раковых клеток мышей, растущих у иммунокомпетентных, сингенных и иммунодефицитных мышей, может дать намек на способность такого вмешательства управлять ICD (в таком случае терапевтическая эффективность будет ограничена у иммунодефицитных хозяев).Однако эта последняя экспериментальная установка по сути не подходит для различения между индукцией ИКД и иммуностимуляцией, не связанной с ИКД (см. Интерпретация МКБ ). Современные методы оценки МКБ in vivo в онкологических условиях. Современные модели для определения способности умирающих раковых клеток вызывать адаптивный, опухолеспецифический иммунный ответ in vivo неизменно полагаются на опухоли мышей, установленные у иммунокомпетентных сингенных хозяев. В моделях профилактики раковые клетки мышей, гибнущие in vitro от потенциального индуктора иммуногенной клеточной смерти (ICD), используются в качестве вакцины либо как таковые, либо при нагрузке на незрелые сингенные дендритные клетки (DC).Способность мышей отклонять (заболеваемость опухолью) или контролировать (рост опухоли) повторное испытание живыми раковыми клетками того же типа, инокулированными через 1-2 недели, отслеживают как признак защитного противоракового иммунитета. В терапевтических условиях опухоли мышей, развивающиеся у иммунокомпетентных сингенных хозяев, обрабатывают аутологичными DC, предварительно загруженными раковыми клетками, подвергнутыми воздействию потенциального индуктора ICD in vitro (обычно в сочетании с иммунологическими адъювантами), или аутологичными цитотоксическими лимфоцитами CD8 + , примированными in vitro посредством те же DC (обычно в комбинации с IL-2 или другими цитокинами, поддерживающими экспансию in vivo).Контроль над опухолью и выживаемость мышей отслеживают как индикаторы терапевтического противоракового иммунитета. В моделях скрытого рака мышиные раковые клетки используются для образования поражений в отдаленных анатомических участках (либо искусственно, либо с использованием естественной способности некоторых клеточных линий генерировать метастазы) с последующим лечением только на одном участке заболевания (как правило, в контексте неактивных в остальном случаев). системная иммуностимуляция). Контроль опухоли на необработанном участке заболевания и выживаемость мышей отслеживают как признаки системного противоопухолевого иммунитета, имеющего терапевтическое значение.Наконец, в внутричерепных / экстракраниальных моделях раковые клетки мыши используются для образования одной внутричерепной и одной экстракраниальной опухоли, только одна из которых получает лечение (обычно системным агентом, который не может преодолеть гематоэнцефалический барьер [BBB] для экстракраниального поражения, или лучевая терапия при внутричерепных поражениях в обоих случаях в комбинации с неактивными иммуностимуляторами). Как и в моделях абскопа, контроль опухоли в необработанном месте заболевания и выживаемость мышей отслеживают как индикаторы терапевтического противоракового иммунитета с системным охватом.Во всех этих моделях мышей, достигающих системного, длительного искоренения болезни, часто повторно проверяют на раковые клетки для мониторинга устойчивости (с теми же раковыми клетками, которые используются для установления болезни) и специфичности (с неродственными, но сингенными раковыми клетками). МКБ — иммуногенная клеточная смерть; IL-2, интерлейкин 2. Три альтернативных подхода к оценке ICD in vivo в иммунокомпетентных сингенных системах критически зависят от измерения роста опухоли на необработанных участках заболевания, что означает, что они могут быть реализованы только с помощью локализованных методов лечения (например, , очаговое ионизирующее излучение и внутриопухолевая доставка терапевтических агентов, которые не могут достичь активных концентраций системно) 79 287–289 или когда необработанный участок биологически недоступен для лечения, но доступен для CTL (например, метастазы в мозг в организме хозяина, получающего химиотерапевтические препараты, не преодолевать гематоэнцефалический барьер).290 Модели так называемой «абсопальной реакции», то есть регрессии поражения вне поля у пациентов, получавших ионизирующее излучение, в удаленное место болезни 291 оказались очень полезными в этой ситуации. Обычно иммунокомпетентным мышам прививают либо (1) раковые клетки для образования двух слегка асинхронных повреждений s.c ., В анатомически удаленных местах, либо (2) склонные к метастазированию раковые клетки для образования пальпируемого поражения s.c . и метастатическое (легкое) распространение.79 288 292 В обоих сценариях только одно из подкожных поражений получает ионизирующее излучение (как правило, в присутствии иммуностимулирующей молекулы, не имеющей системного эффекта от одного агента) и ответ необлученного поражения, метастатической нагрузки и общая выживаемость контролируется как индикаторы индукции ICD в сочетании с активацией адаптивного иммунитета с системным охватом.78 79 287 288 292 293 Мышей, отвергающих облученные и необлученные поражения, можно повторно подвергнуть испытанию через 30-40 дней после искоренения заболевания теми же раковыми клетками, которые использовались первоначально. для оценки долговечности защиты, а также с сингенными раковыми клетками другого типа для контроля ее специфичности.49 292 293 Аналогичным образом, различные типы клеток могут использоваться для образования первичных и вторичных поражений, чтобы подтвердить, что эффект вакцинации in situ, создаваемый ICD, является антиген-специфичным.294 Наконец, модели одновременного внутричерепного и экстракраниального заболевания были использованы для мониторинга способность системных химиотерапевтических агентов, которые не могут проникать через гематоэнцефалический барьер и фокусное ионизирующее излучение, вызывать противоопухолевый иммунитет на периферии.295 Следует отметить, что в этих последних моделях наличие экстракраниальных поражений увеличивает эффективность иммунотерапии против краниальных новообразований за счет стимулирование транспорта CTL, 296 хотя актуальность этого явления для иммунитета, управляемого ICD, еще предстоит выяснить. Все эти модели подходят для исследований ex vivo, направленных на: (1) характеристику DAMPs, выделяемых раковыми клетками, реагирующими на стресс in situ; (2) иммунологическое профилирование APC и CTL, лежащих в основе инициирования и реализации противоопухолевого иммунитета in vivo, и (3) идентификация механистических и коррелятивных аспектов ICD, вызванных in vivo выбранным стрессором (ами) (например, с истощением, стратегии блокировки или нейтрализации) .79 287 288 293 Большинство анализов, доступных в настоящее время для оценки склонности RCD к управлению адаптивными иммунными ответами, не учитывают должным образом сложность, присущую МКБ, которая (как подробно описано выше) в конечном итоге представляет собой весьма серьезную проблему. контекстуальный процесс, который зависит от (1) инициирующего стимула, (2) отвечающей клетки и (3) хозяина (рисунок 1).В этом контексте интерпретация анализов, связанных с ИКД, сталкивается с рядом проблем, которые всегда следует учитывать. Суррогатные биомаркеры ИКД, такие как накопление цитозольной ДНК, воздействие шаперонов ER на поверхности клетки или высвобождение АТФ и / или HMGB1 умирающими клетками, а также биомаркеры стрессовых реакций, лежащих в основе их выброса, сыграли важную роль в характеристике ключевых молекулярных игроков процесса и идентификации потенциальных индукторов ИКД в больших усилиях по скринингу.183 184 262 Однако не все триггеры ИКД действуют через одни и те же молекулярные механизмы, о чем свидетельствует способность ФДТ на основе гиперицина инициировать противоопухолевый иммунитет независимо от аутофагической способности злокачественных клеток.203 Более того, эмиссия связанных с ИКД DAMPs в соответствии с правильным пространственно-временным паттерном требуется, но недостаточно, чтобы APC инициировали CTL-зависимые иммунные ответы против умирающих клеток. Таким образом, сердечные гликозиды вызывают многоплановую стрессовую реакцию, достигающую кульминации со всеми основными суррогатными биомаркерами ИКБ, и все же не могут установить защитный иммунитет в тестах на вакцинацию золотого стандарта.250 Эти наблюдения предполагают, что способность любого стрессора управлять вариантом RCD, связанным с адаптивным иммунитетом, не может быть экстраполирована с помощью анализов in vitro, направленных на раковые клетки. Хотя их масштабируемость для скрининговых приложений ограничена, иммунологические анализы, проверяющие способность APC, примированных умирающими клетками, участвовать в последовательном процессе, ведущем к перекрестному праймингу (что является абсолютным требованием для адаптивного иммунитета в этих условиях), очевидно, предлагают больше точная оценка иммуногенности RCD.Однако эти анализы также по своей сути ограничены тем, что они неспособны оценить две основные предпосылки для перекрестного прайминга: (1) способность APC физически достигать сайтов RCD и (2) наличие наивных клонов Т-клеток, специфичных для антигенов. экспрессируется умирающими клетками, что в конечном итоге требует проверки на моделях in vivo. Анализы вакцинации оказались очень полезными для демонстрации того, что сингенные умирающие клетки могут управлять адаптивным иммунитетом в присутствии адекватной антигенности и адъювантности.20 22 153 178 208 297 Однако использование не опухолевых хозяев обеспечивает очень высокую степень чувствительности, что не обязательно может быть выгодным, если конечной целью является клиническое применение. В этом контексте абскопальные и внутричерепные / экстракраниальные модели могут иметь повышенную патофизиологическую значимость, поскольку (с ограничениями, описанными выше) они имитируют установленное метастатическое заболевание у людей. Однако эти модели ограничены тем, что они могут измерять только системный иммунитет к местным методам лечения или агентам, которые не проникают через гематоэнцефалический барьер.79 288 Более того, в значительной степени отражая клинический сценарий, выявление системного иммунитета с потенциалом к искоренению заболевания в этих моделях является сложной задачей и часто требует предоставления дополнительных иммуностимулирующих сигналов, которые противодействуют периферической толерантности.77–79 Такая ограниченная чувствительность (хотя клинически значима). может быть вредным на ранних этапах открытия, когда оптимальные условия ICD еще не определены. Как группа, модели in vivo, относящиеся к МКБ, подвержены множеству проблем, включая тот факт, что можно исследовать только мышиные системы, и нельзя исключать, что молекулы и популяции клеток, действующие в условиях человека, могут быть разными (при хотя бы до некоторой степени).298 299 Более того, все современные модели для обнаружения ICD in vivo полагаются на установление первичных поражений с помощью линий мышиных раковых клеток, которые (1) были иммуноотредактированы и приобрели способность уклоняться от иммунного надзора у своего первоначального хозяина (подразумевая, что они не воспроизводят должным образом первичный онкогенез), (2) имеют относительно низкую и однородную мутационную нагрузку по сравнению с человеческим заболеванием (и, следовательно, не могут воспроизвести мутационный и антигенный ландшафт опухолей человека), (3) обычно не создают сложного стромального и эндотелиального архитектура как следствие их повышенной скорости пролиферации (которая отличается от человеческих новообразований) и (4) имплантируются путем инъекции, которая сама по себе может опосредовать, по крайней мере, некоторую степень иммуностимуляции.300–303 Наконец, потребность в полностью сингенных настройках (для предотвращения отторжения на основе несоответствия HLA) значительно ограничивает спектр клеточных линий и штаммов грызунов, которые могут быть использованы для этой цели, с преобладанием моделей, основанных на C57BL / 6 или BALB / c фон.304 Текущие попытки обойти, по крайней мере частично, эти проблемы включают использование ортотопических моделей (которые предлагают улучшенные характеристики микросреды), моделей, управляемых трансгенами (которые могут предложить лучшее представление о раннем онкогенезе) и моделей, управляемых канцерогенами (которые имеют превосходную неоднородность).305–307 Однако не все эти системы совместимы с вакцинацией и / или анализами скрытого диагноза, подразумевая, что индукция ИКД может быть неточно решена только путем дополнения наблюдений in vitro терапевтической эффективностью у иммунокомпетентных по сравнению с иммунодефицитными животными. Более того, значительные усилия прилагаются к созданию гуманизированных мышей, что в конечном итоге может позволить оценить индукцию ИКД in vivo с человеческими раковыми клетками.308–310 Чаще всего эти модели включают приживление функциональных иммунных клеток человека из различных источников в организм человека. мышей с высоким иммунодефицитом как средство (частичного и временного) восстановления функциональной иммунной системы человека.304 Основные ограничения этого подхода (которые различаются по степени тяжести в зависимости от точного протокола эксперимента) включают: (1) способность иммунных клеток человека реагировать против своих собратьев мыши из-за межвидовой несовместимости и, как следствие, болезни трансплантат против хозяина311 312; (2) ограниченная способность (по крайней мере, некоторых) цитокинов мыши поддерживать восстановление иммунных клеток и функционировать через рецепторы цитокинов человека313; (3) плохо изученная до сих пор перекрестная связь между остаточными компонентами иммунной системы мыши (например, макрофагами, гранулоцитами, эндотелиальными клетками) и восстановленными клетками человека309 и (4) отсутствие селекции тимуса.314 Хотя усовершенствованные стратегии для обхода этих проблем изучаются, включая использование мышей, сконструированных для экспрессии цитокинов человека, а также коимплантацию фрагментов тимуса 313, 315–320, эта технология до сих пор является незрелой для оценки ICD в организме человека. Таким образом, оценка ICD требует экспериментальной поддержки со стороны различных анализов in vitro и in vivo, которые должны кумулятивно оценить способность злокачественных клеток, подвергающихся RCD в естественном анатомическом местоположении, рекрутировать APC и стимулировать их для инициирования адаптивного противоракового иммунитета. Накапливающиеся данные демонстрируют, что начало ИКД имеет решающее значение для устранения инфекционных патогенов и выделяется как основная терапевтическая цель терапии рака, особенно с учетом текущего клинического успеха ИКБ321 322 Действительно, способность нескольких агентов управлять ICD в онкологических условиях затрудняется надежными иммуносупрессивными схемами, установленными в TME во время совместной эволюции опухоль-хозяин, и ICB могут быть инструментами для инактивации таких схем.56 77 79 323 324 Есть три основных препятствия, мешающих реализовать полный клинический потенциал индукторов ИКД. Во-первых, большинство этих агентов были разработаны клинически на основе парадигмы максимально переносимой дозы (МПД), и теперь ясно, что повышенная цитотоксичность не обязательно совпадает с оптимальной иммуногенностью.194 Более того, подавляющее большинство клинически используемых индукторов ИКД имеют были разработаны доклинически на иммунодефицитных моделях болезни, что подразумевает, что мало что известно об их влиянии на иммунную систему хозяина.299 302 Во-вторых, несмотря на значительный прогресс за последние два десятилетия, наше понимание RCD-ассоциированной передачи сигналов DAMP остается ограниченным. В частности, ограниченное внимание было уделено изучению иммуносупрессивных DAMP, включая (но не ограничиваясь ими) фосфатидилсерин, простагландин E 2 и аденозин, особенно в контексте ICD.68 325–327 Интересно, что MAMP также могут быть иммуносупрессивные, и они важны для установления симбиоза.328 Влияние метаболизма, 329 кишечной микробиоты330 и центральной нервной системы331 на высвобождение и активность DAMPs также еще предстоит выяснить.Наконец, ключевая роль хозяина в обнаружении ICD в основном изучалась с точки зрения адъювантности, то есть связанной со способностью хозяина декодировать передачу сигналов DAMP через PRR5. И наоборот, мало что известно о репертуаре TCR хозяев, которые реагируют на ICD с устойчивым адаптивным иммунитетом по сравнению с хозяевами, которые этого не делают, и о влиянии факторов окружающей среды и поведения (например, микробиома, диетических привычек, стресса) на определение ICD у хозяина. Наряду с созданием гуманизированных моделей грызунов, которые позволяют исследовать МКБ in vivo (хотя и с оговорками, связанными с микросредой мышей), мы считаем, что эти проблемы в настоящее время являются основными проблемами в ближайшем будущем.Мы предполагаем, что клиническая эффективность многочисленных агентов, используемых в настоящее время для лечения рака, может быть значительно повышена, если мы получим возможность использовать их в качестве индукторов ИКД. Новые технологии постоянно улучшают нашу способность контролировать иммунологические изменения, происходящие у пациентов, реагирующих на индукторы ИКД, включая изменения во внутриопухолевом и циркулирующем репертуаре TCR332. В целом, настало время принять вызов и реализовать клинический потенциал индукторов ИКД. и улучшить исход заболевания для различных онкологических больных. Nuovo кроссовер Infiniti QX30 — это большая база. La prima del modello è avvenuta alla fine dell’autunno 2015 e le vendite sul mercato russo sono iniziate il 1 ° settembre 2016. Inffect, l’Infiniti QX30 не является большим разнообразием dalla berlina Q30 и может быть ужасным, что и семплицовый унаследовал модификацию incrociata. Вероятно, главное преимущество последнего пикколо-кроссовера премиум-класса Nissan — это асфальт.Верно, это последняя версия модели для тех, кто любит дизайн Aziendale Infiniti. Curve lisce caratteristiche, fratture e rigonfiamenti. Nella parte anteriore della nuova Infiniti Ku X 30 2017-2018, abbiamo un cofano leggermente abbassato con un leggero rilievo lungo i bordi, контакт с верхним бордом делла грилия дель радиатор. Quest’ultimo vanta una forma intricata, bordi argento e trama a rete nera e un logo imponente al centro. Gli angoli del reticolo sono a contatto con l’ottica della testa aggressiva, simile agli occhi diabolici di un predatore. Lungo i bordi in basso ci sono piccoli rettangolari fendinebbia, tra cui è Inserito un Insert decorativo in argento, che ricorda la protezione sottoscocca con apertura a griglia. Защитите Infiniti QX30 от новой корпорации, изогнутой формы и комплекта carrozzeria из защищенного пластика, не имеющего отношения к окружающей среде. Профильное приложение динамично грациозно Алла Линия дель Тронко инклината и Алла Линия аффузолата дель ветро.Il montante C curvo «rotto» sembra originale. Probabilmente di all angoli, la nuova poppa QX30 2017 hail design complesso ericco. L’auto ha risvuto uno stretchto finestrino curvo, sul quale è appeso uno spoiler con luce di stop incorporated. A forma di cuneo si trovano ai bordi luci posteriorila metà raggiunge il portellone. Il paraurti sembra impressionante, la cui parte inferiore è realizzata in argento — un paio di tubi di scarico retttangolari sono integrationti in esso. Infiniti QX30 2017-2018 — кроссовер Compatto класса премиум и международная реальность. Предложение, созданное на основе дизайна, сделанного в прошлом году жертвователем Mercedes. Ci sono molte somiglianze tra i modelli dei due marchi, ma il «giapponese» ha alcune caratteristiche originali. Рисование многоцелевого использования в гранулах и трэцз, привлекающих внимание к традиционному стилю управления: принципам работы, качеству и информативности отображения. Различия между Mercedes и новой информационно-развлекательной системой Infiniti QX30 интегрированы с панелью и одновременно чувствительны. Предложение, это circondato da una plastica molto mediocre. Сразу после того, как вы удалите вентиляцию, вы получите качественную единицу управления мультимедиа и другие функции. Следующие за звуком рипортаты я управляю климатом, и пой с’е ла zona di trasmissione orizzontale. Davanti ci sono sedili molto comodi, che però, con una natura dinamica della corsa, non Possono vantare un appoggio laterale sicuro.La fila posteriore — это французская ангела, falsa razza crossover colpisce. L’Infiniti QX30 — это внедорожник, подходящий для всех. L’auto ha quanto segue sizesi: Lunghezza — 4,425 мм, larghezza — 1,815 мм, altezza — 1,515 мм, passo — 2,700 мм. Этот песо в сумке составляет 1,542 кг и мешок объемом 430 литров. Кроссовер Infiniti KX 30 2017 года имеет независимую поддержку: предыдущий тип McPherson и заднюю многорычажную связь.Freni a disco ventati su entrambi gli assi. Il modello monta cerchi da 18 pollici con pneumatici 235/50. Altezza libera dal suolo — 202 мм. Nel mercato russo, la QX30 — это предложение с единственным бензиновым двигателем объемом 2,0 литра, который содержит 211 CV. e 350 Нм коппии. Мотор является одним из семи роботов-роботов Марсии с доппией и системой интеграции. Павел Карин ди Драйв.Кроссовер Infiniti QX30 и новая модель кроссовера Infiniti QX30: В эффетти, оверклоке это чудо, с динамической солидарной динамикой — неи 7,3 секунды дичиарати. Fino a cento non ho dubbi. Скорость 130 км / ч составляет около 2.000 гири, это двигатель, это соображение, не является удачным, иль, что не может быть тяжелым движением с большим движением. Ротоли в «Драйве» 70 км / ч — на моторе, с прицелом, квази-аль-минимо. Se traduci in Sport, i giri salgono pi in alto del desiderato. В эффетти, новом QX30 для davvero un buon lavoro in curva, rotola appena percettibilmente e scivola в modo prevedibile con tutte e quattro le ruote, ma lo sforzo di sterzata, sfocato e non puoi godertelo. Ma i freni ventati «in cerchio» sono decisamente ottimi: e il primo stick si fa sentire, e il dosaggio della decelerazione è chiaro. Tattilmente si sente implicitamente, ma per la traiettoria in curva, Infiniti QX30 tiene saldamente a qualsiasi velocità Entro limiti ragionevoli.La Lamentela Principale — это комфорт, который доволен латеральным дизайном на открытом воздухе. La sospensione è densa ed è per questo che al guidatore piace più dei Passeggeri: sente che tra il corpo e le ruote non ci sono archi tremanti, ma i muscoli sono in buona forma, e quindi si excita coraggiosamente su quasi de la maggior irregolarità. Я compagni non provano disagio, ma su tutte le buche, ad eccezione di quelle che потенциально assorbire pneumatici da 18 pollici con un profilo del 50%, esce lo scuotimento laterale. Avrebbe potuto essere meno invadente se Infiniti non avesse Inseguito gli pseudo-sport. È Positivo Che la Cabina sia Silenziosa e вероятностная система отмены слухов. Внедорожник Infiniti QX55 — это великий естественный автомобиль, созданный в 2004 году. Авто был создан на платформе Nissant Pathfinder Armada. Entrambe queste macchine vengono costruite nel nuovo stabilimento di HMC a Canton, Mississippi, USA.Этот дизайн авто является базовым для тела длинного типа chiuso. Эта модель Infiniti QX 55 использовала предыдущую и заднюю независимые … Для автомобиля установлена новая двигательная установка V8 DOHC объемом 5,6 литра с 340 каваллией. Мотор, похожий на виену, был использован в Pathfinder Armada и в пикапе Nissan Titan, который является грандиозным естественным автомобилем. Inoltre, авто — это система интегрированного перевода Shift-On-The-Fly. … L’Infiniti QX56: полноразмерный внедорожник — это автомобиль, созданный специально для североамериканского континента.Автоматическая позиция поставляется с лучшей версией, более высокой и качественной. Nissan внедорожник Pathfinder Armada. Другой автомобиль — пикап Nissan Titan. Infiniti QX 56 представляет собой статую презентацию для первого автомобильного салона в Лос-Анджелесе в 2004 году. В 2006 году был произведен рестайлинг в 2007 году в России. Интересно, что вы можете использовать русский язык только с одной версией интегрального перевода QX56. Negli Stati Uniti является одним из вариантов последующего перевода.В марте 2010 года дебютировал второй генеральный внедорожник премиум-класса. Авто sulla sulla base di Pattuglia Nissan 2010. Это модель, которая гуадагнато в лунгхецце и большом количестве, ма è diventato tozzo. Доступна версия для набора и отправки сообщений Infiniti QX56. Авто 2011 года оснащено двигателем V8 объемом 5,6 литра, имеет потенциал 400 каваллов. Accoppiato con un sette velocità trasmissione Automatica il motore in Grado di Accerare l’auto 100 км / ч за 6,5 секунды. Nell’aprile 2010, Infiniti имеет новую версию кроссовера Grandezza naturale QX56.В первую очередь, авто — это статуя на Нью-Йоркском автосалоне и в объявлениях о Салоне Моска. Это различное предыдущее поколение, которое является созданным на базе Nissan Armada, новым внедорожником и созданием нового поколения Nissan Patrol. Inoltre, внедорожник премиум-класса, имеет большую высоту и высоту, имеет базовую высоту 10 сантиметров и высоту до 22 сантиметров. Allo stesso tempo, l’altezza dell’auto — это уменьшение мгновенно на 8 сантиметров.Esternamente, l’Infiniti QX56 является аналогом своего прототипа соло с fianchi della carrozzeria. La parte anteriore e quella posteriore dell’auto sono Rese più sportive. Equipaggiamento tecnico Il QX56 viene copiato dall’allestimento premium della Patrol. Двигатель V8 установлен в автоматическом режиме, имеет потенциал 405 каваллов и лаворанов в сочетании с автоматической камерой и 7 велотренажерами. Интегрированная система перевода представляет собой режим полного привода All-Mode-4WD. Принципиальные характеристики системы Hydraulic Body Control Motion, которая стабилизирует автомобиль на высокой скорости.Внедорожник получил транспортное средство от Nissan Patrol. Салон Infiniti QX56 2011 разработан специально для персональной установки и имеет более низкую версию, а базовая часть окрашена в гранулы. … SUV Новый внедорожник Infiniti стал ярким и реалистичным внедорожником.Дебютный день наступил 29 ноября все популярное большинство мондиальских дней, которое произошло в Лос-Анджелесе в 2017 году. Nuovo модель Infiniti QX50 2019-2020 Модель — это средние размеры с внутренними соответствиями. L’Infiniti QX50 2 2019-2020 модельного года unisce eleganza, praticità e muscolosità. Diamo uno sguardo pi da vicino all caratteristiche e all novità apparenza esterna premiere Infinity. Gli sviluppatori hanno fatto del loro meglio sulla loro idea e hanno creato una novità alla moda e alla moda, который содержит такие элементы дизайна в ombra anche le opzioni più popolari dei Principali concorrenti, anch’esse state agiornate.Il carisma delle nervature sul cofano e nella zona dei fianchi conferisce luminosità all’auto, i fari installati, che sono responsabili del faro, sono dotati di LED. Задняя перспектива делла Нуова Infiniti C’è una griglia in testa, che è un marchio. Предыдущие параметры нового Infiniti KuX 50 имеют определение для присутствия большого числа частей аэродинамических характеристик, уникальных по … Gli esperti chiamano i ritagli per i passaruota semplicemente great e caratteristica se уверен, что одна линия пиластроата в четырехугольнике. Le luci di posizione con led e il paraurti dotato di element agiuntivi (tubi di scarico) sotto forma di un trapezio. В общем, дизайн dell’auto nella nuova carrozzeria esprime la sua Individualità, Potenza e mascolinità con una mancanza di aggressività. Gli interni dell’Infiniti QX50 2018 звучит как часть разговора, особенно если вы хотите узнать, что такое современный и азиатский стиль. La decorazione degli interni colpisce per la sua originalità, это многоцветный продукт, использующий пелле высокого качества из разнообразных сортов.La decorazione contiene anche elementi in legno, plastica morbida di alta qualità, piccoli dettagli in alluminio cromato. салон Infinity CuX50 2018 Questa combinazione di materiali crea interni unici e delizia anche i giornalisti automotivei pi esigenti. Пелле используется для всех внутренних элементов: воланте, паннелло, порте, браччиоли, седили и персино иль помелло дель камбио. Модель представляет собой современный атрибут, который способствует заметному развитию процесса руководства внедорожника.Sono stato colpito da una funzione interessante: un proiettore che ha la capacity di visualizzare le informazioni richieste sul vetro proprio davanti al guidatore, cioè il parabrezza. Certo, c’è un azionamento elettrico, comode sedie. I Passenger nell’ultima fila Possono sperimentare il movimento originale intorno alla cabina utilizzando una slitta unica. Grazie all’aggiornamento della piattaforma, новая модель L’Infinity CuH 50 2018-2019 ha completetamente cambiato le sue proporzioni.Премьера — это заметный размер, размер которого составляет 51 мм, размер больше, меньше, меньше 102 мм. Анче в altezza l’auto è aumentata di 64 mm, ma gli sviluppatori hanno ridotto il passo di 80 мм. Di conguenza, abbiamo appreso le seguenti Dimensions: Новое поколение черт в легковом стиле, диаметром от 19 до 20. Для производства нового корпоративного внедорожника, используется сверхпрочное масло с повышенной устойчивостью — около 980 МПа. Il peso della carrozzeria stessa senza attrezzature agiuntive e verniciatura è di около 419 kg и anche il suo livello di rigicità è aumentato del 23 процентов. За количество сумок Infiniti QX50 2018, имеющее емкость в 895 литров, можно было сделать это лучше всего.Quando i sedili sono ribaltati, questo volume aumenta fino a 1.048 litri. Модель доступна в различных вариантах оснащения. Базовая конфигурация — внутренняя часть в пелле, электронном и рискалдном, импианто аудио, климатизаторе. Il prezzo comprende anche la verniciatura in un elegante colore Metallizzato, cerchi in alluminio, tettuccio apribile, accesso al motore senza chiave di acnsione, alzacristalli elettrici, specchietti riscaldati.Установите различные системы, которые управляют движением. Come opzione agiuntiva, si propone di simulare il movimento di un’auto e trasferire queste information sotto forma di un’immagine virtuale su un grande schermo, che viene mostrato in modalità a colori. È inoltre возможность установить сенсорные элементы и avvisi sulla situazione sulla strada. Кроссовер второго поколения, оснащенный бензиновым двигателем и двигателем VC-Turbo с объемом 2,0 литра.Потерянный автомобиль 272 … Модель с фронтальным двигателем или quattro с двигателем, движется на скорости до 230 км / ч. L’accelerazione 100 chilometri viene eseguita in soli 6,7 secondi per il pieno e in 6,3 secondi per trazione anteriore … Cento chilometri di strada richiedono 8,6-9,2 литра. Мотор, который функционирует должным образом, изменен без одиночной компрессии, имеет объем от 1997 см3 до 1970 см3, после сжатия и регулируется с 14: 1 до 8: 1 в секунду. Una delle caratteristiche dell’auto — это презентация интеллектуального руководства. Вы можете выбрать один из нескольких типов мультидисковых фризонов, который вам понравится, и вы получите желаемое из карбюратора. La sospensione indipendente davanti a un montante di tipo McPherson e un multi-link nella parte posteriore. Поставщик автомобилей в России, начатый 1 августа 2018 года. Строгое поставка своей конфигурации и далекой настройки.È: Все кроссоверы сделаны без единой интеграции. Видео тест-драйв Infiniti QX50 2019-2020: Новая модель Infiniti KuX 50: Dipendenti esperti e la nostra base materiale e tecnica ci согласен с эффектами автомобиля Infiniti QX находится в Mosca и nella region di Mosca, sia в других регионах.Federazione Russa … Collaboriamo con clienti private, piccole imprese e grandi imprese. Все наши клиенты рисуют в отдельном порядке, находящемся ниже, в отдельном разделе, посвященном системе обслуживания: l’acquisto di un’auto Infinity KuH. Acquistare un’auto da noi richiede solo quattro passaggi: Если вы хотите купить Infiniti QX без уведомления? Questa è, prima di tutto, l’efficienza di tutte le azioni. Oltre a pratiche burocratiche informità con la legalazione esistente e riszione di un calcolo in una forma comfortiente. Decidendo ди Vendere Infiniti KuH профессионально, это защищает от всех ситуаций forza maggiore, которые неизбежно производятся в зависимости от того, что вы делаете в одиночку. Стоимость операций — автоматическое приобретение Infiniti QX, является индивидуальным стимулом для всего производства, технического обслуживания и вторичного рынка… Scopri il costo optimato della transazione — riacquisto auto Infiniti QX, puoi utilizzare un comodo servizio: la valutazione rapida online, disponibile 24 or su 24. Это предложение может быть принято: Vendere или no? Ma credimi, utilizzando i servizi del nostro servizio, risverai l’offerta più vantaggiosa. Facciamo un acquisto urgente di Infiniti KuH con qualsiasi проблема, chilometraggio elevato, garanzia e credito, utile e nemmeno in movimento. Evacuiamo noi stessi i veicoli non trasportabili da qualsiasi parcheggio, e in modo completetamente gratuito.Il riscatto delle auto usate per noi è un lavoro quotidiano Che svolgiamo semper ai massimi livelli. Свяжитесь с нашим центром и помощником по всему миру! Nel 2019 dovrebbe entrare nel mercato la nuova Infiniti QX70 e ci proponiamo di valutare quali saranno gli esterni e gli interni della novità basati sulla prima foto del modello, e anche di scoprire, cosa specifichev del modello, e anche di scoprire, cosa specifichev, opzioni noverdi avan lusso. Infinity — это дочерняя компания Nissan, созданная специально для автомобилей премиум-класса.QX70 — это кроссовер премиум-класса с пятью средними размерами, которые являются наиболее популярными для первого поколения 2002 года. В 2013 году он был произведен вторым поколением автомобилей. Основные преимущества, которые интересны для автомобилей: Подготовка новой версии Infiniti L’anno modello QX70 2019 указана начальная фотография обновленной версии кроссовера в многочисленных опубликованных автомобильных версиях полностью.Successivamente, la società ha confermato le informazioni sullo sviluppo della prossima modifica dell’auto di lusso. Модифицировано для Infiniti QX70 2019, если вы хотите увидеть новые фотографии кроссовера. Дизайн обновленной версии является значительным разнообразием авто второго поколения. Существенные значения камбайамента в предыдущей части, означающие, что реализовано, когда проект был реализован, с лучшими планами: La parte posteriore dell’auto is formata da: Новый интерфейс Infiniti QX70 2019 соответствует требованиям, предъявляемым к автомобилю премиум-класса, и создан для комфорта, уровня комфорта и архитектуры. Центральная консоль более информативная, ее дизайн — это реалистичная форма, созданная специально для вас. Allo stesso tempo, in alto si trova un cruscotto digitale e un monitor a colori del complesso multifunzionale, protetto da una lunga visiera antiabbag охраной.Sul livello successivo ci sono i diffusori attrezzatura climaticae un vano portaoggetti si trova nella zona più bassa. Inoltre, l’interno dovrebbe essere Evidenziato I sedili posteriori hanno nuovo design, che ha permesso di rendere l’interno pi spazioso.Inoltre, hanno la possibleilità di regolare lo schienale separatamente. Inoltre, я сделал возможным essere ripiegati in un rapporto 60/40 formando un pavimento piatto, che non solo aumenta le sizesi del vano bagagli, ma fastena anche il carico (scarico). Nel design nuova Infiniti QX70 2019 с использованием материалов: Размеры кроссовера: Для комплектного кроссовера, который может быть показан заранее и следуя за двигателями: Для передачи интегральной траектории, которая была создана автоматически с помощью 7 марта. Tra le varie dotazioni moderne del crossover, si segnalano: Последний финал всех доступных аппликаций, созданных при помощи оригинальных приложений для кроссовера. Прежде чем новый Infiniti делла более высокий класс, конкурирующий с популярными моделями: Новые коммерческие российские модели Infiniti QX 70 были установлены на всех устройствах 2019 года.Secondo i dati preliminari del produttore, per gliakennti domestici, la novità manterrà le designazioni esistenti delle opzioni di configurazione. Первоначально, «Премиум», цена за 3 миллиона 650 миллионов рублей. Содержание Интервалы замены технических жидкостейПравила замены технических жидкостейЗамена жидкости в ГУРЗамена тормозной жидкостиЗамена охлаждающей жидкостиЗамена масла в коробке передачКак поменять антифриз — пошаговая инструкцияКак правильно . . . Содержание LADA 110 — ВикипедияВАЗ-2110 (LADA 110)ПравитьМодификацииПравитьВАЗ-2111 (LADA 111)ПравитьМодификацииПравитьВАЗ 21124 1. 6 литра 16v 89 л.сЛучшие АКПП и двигатели для ВАЗ 2111, характеристики, бензиновые, дизельные . . . 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001
Метаболические ограничения стимулируют самоорганизацию специализированных групп клеток
12-часовая репортерная колония глюконеогенеза (воздействие
<5 секунд). Моделирование развития колонии с использованием модели с использованием различных концентраций глюконеогенных клеток A) 95% B) 50% C) 10% в начале развития колонии.
Глюконеогенные репортерные колонии дикого типа в возрасте 7 дней (репортер
PCK1 ), выращенные в среде, содержащей этанол + глицерин в качестве единственного источника углерода. Новый Infiniti QX50 — тест-драйв ZR. Новый Infiniti QX50
Технические характеристики
INFINITI QX30 MERCEDES-BENZ GLA 250 Габаритные размеры, масса Длина мм 4425 4424 Ширина, мм 1815 1804 Высота, мм 1475 1494 Колесная база, мм 2700 2699 Клиренс, мм 202 202 Снаряженная масса, кг 1542 1505 Полная масса, кг п.d. 2005 г. Объем багажника, л 430 481 Объем топливного бака, л 56 56 Динамика, КПД Максимальная скорость, км / ч 230 230 Время разгона 0-100 км / ч, с 7,3 6,6 Расход топлива, л / 100 км городской цикл 8,9 8,7 загородный цикл 5,7 5,5 смешанный цикл 6,9 6,6 Техника Тип двигателя бензин, 4 цилиндра бензин, 4 цилиндра Рабочий объем, см 3 1991 1991 Мощность ч.п. при мин -1 211 при 5500 211 при 5500 Крутящий момент Нм при -1 350 при 1200-4000 350 при 1200-4000 Трансмиссия роботизированный, 7-ступенчатый роботизированный, 7-ступенчатый Привод полный полный Передняя подвеска независимый независимый Задняя подвеска независимый независимый Тормоза (перед / зад) диск диск Размер шин 235 / 50R18 235 / 50R18 Эксплуатационные расходы * Транспортный налог, р. 13 715 13 715 ТО-1 / ТО-2, п. 9000/34 600 12 600/14 100 ОСАГО, п. 11 532 11 532 Каско, стр. 119 370 167 530
Экстерьер Infiniti QX30 удачно гармонирует с плавными футуристическими изгибами, интегрированными спортивными элементами и претенциозными штампами, которые не только придают внешнему виду кроссовера оригинальность и мускулистость, но и обеспечивают отличную аэродинамику и дополнительную прижимную силу, повышающую устойчивость автомобиля при маневрировании.
Электромеханический усилитель с изменяемым передаточным числом встроен в реечный рулевой механизм пятидверки.
В базовой комплектации кроссовер имеет шесть подушек безопасности, кожаную отделку, адаптивные светодиодные фары, подогрев передних сидений, двухзонный «климат», мультимедийный центр, аудиосистему Bose, камеру заднего вида, 18-дюймовые колесные диски, передние и задние парктроники и прочее оборудование, и просят за него минимум 2 730 000 руб.
Более престижная версия GT Premium также может похвастаться наличием камер кругового обзора, панорамной крышей, светодиодной внутренней подсветкой, зеркалами с эффектом памяти и сиденьем водителя, а также вставками из натурального дерева, а Cafe Teak отличается сочетанием алькантары и коричневой кожи Nappa премиум-класса.За каждую из этих версий придется заплатить от 2 830 000 рублей. Персонаж — изменяемый
Двигатель 2.0 VC-Turbo по сравнению с предшественниками (версии для США)
Жизненное положение — активное
Внутренний мир многогранен
История модели
Экстерьер
Интерьер
Технические данные и комплектация
В конструкции кузова нового поколения Infiniti QX70 2019 года используется множество деталей и агрегатов из алюминия, легких, но прочных сплавов и углерода. Это позволило увеличить прочность и снизить вес машины.
Старт продаж
Содержание отзыва:
После такого знакомства многие подумали, что Ку30 — детище концерна VAG и Infinity. Но нет. В целом этот хэтчбек задумывался как конкурент A-класса, Audi A3, BMW 3-Series. Но японцы их всех перехитрили. Они взяли платформу у гораздо более совершенной GLA. И это нормально, что премиальный кроссовер вдруг стал премиальным хэтчбеком на другом конце света. Infiniti Q30 design
Выше уже было сказано, что люк действительно хорош. Компания продвигает свой дизайн как уникальный и неповторимый, все то же самое ранее было показано нам Mazda в концепте Kodo.Но не будем слишком строгими, ведь, несмотря на это, на новинку приятно смотреть. Итак, передок выполнен в соответствии со всеми стандартами бренда: невысокая длинная губа, широкий воздухозаборник по центру, небольшие противотуманные фары и многогранная форма. И формы эти непростые, как в большинстве бюджетных автомобилей, здесь действительно приложил руку стильный дизайнер с хорошим вкусом.
В профиль новый Infiniti Ku30 больше всего похож на Mazda, но в оправдание хочу сказать, что хэтчбек на немецком шасси отличается более агрессивными формами, что сразу заставляет забыть о сходстве.Волнистая форма, покатая крыша с узкой линией остекления — смотрится элегантно, а в задней части можно увидеть небольшие края задних фонарей. Интерьер Infinity Q30
В салоне, как и положено автомобилю такого класса, царят роскошь, красота и стиль. Сразу хочется все потрогать, все пощупать (это для тех, кто говорит о пластике — не трогайте, не разочарует).Пластиковых деталей практически нет — только кожа, кожаный салон уже есть в базе.
Начнем по порядку, так что мы сели на водительское сиденье и можем регулировать его как душе угодно, есть 17 регулировок в разные стороны, память на две позиции. На руле много кнопок, ни одной новинки, а под ним — подрулевые лепестки. В спортивном режиме они очень выручают, об этом позже.
Центральная консоль, наверное, выглядит солидно и строго, а не как-то иначе.Есть огромный набор кнопок, которые четко сгруппированы, поэтому не может быть путаницы. Внизу расположен блок климата, ну и все это венчает большой мультимедийный и навигационный сенсорный дисплей. Кстати, выглядит многоуровневая приборная панель просто шикарно.
Задний ряд сидений не отличается свободным пространством, он формованный для трех человек. Спинку можно сложить. Максимальный объем багажника, по официальным данным, составляет 463 литра. Как-то не хватило. Infiniti Q30 Технические характеристики
Хэтчбек, как уже было сказано, позаимствовал платформу у премиальной и достаточно высокотехнологичной GLA. Это помогало хэтчбеку всячески. По замыслу конструкторов, главной характеристикой для них при регулировке подвески и элементов силовой установки были комфорт и плавность хода. Для этого разработаны специальные амортизаторы с регулировкой электрической жесткости.
Теперь о том, чего мы никогда не увидим. Еще есть полторашка мощностью 109 лошадей, она дизельная. Конечно, турбина не обошлась и без нее, так что 260 Нм крутящего момента — совсем не новость. Зато расход 4,7 литра вполне приятен, учитывая разгон до сотни за 12 секунд и максималку 188 км / ч. Лучший вариант для города найти очень сложно.
Теперь подробнее о мощностях. Речь также идет о дизельной турбо четверке, которая имеет необычный объем — 2.1 литр и развивает ни много ни мало 170 лошадей и 350 Нм. Сразу скажу, это круто. Поскольку разгон до сотни занимает всего 3 секунды, максимальная скорость составит 220 км / ч. Неплохой результат, особенно с учетом расхода топлива 5,1 литра солярки. И это по стандартам Евро-6. Бактериальное слияние клеток является опасным сигналом, запускающим путь cGAS-STING через образование микроядер.
Значимость
Реферат
Результаты
Burkholderia , дефектная по T6SS5 или внутриклеточной подвижности, вызывает значительно более низкую экспрессию гена IFN типа I. Бактериальное слияние клеток индуцирует экспрессию гена IFN типа I независимо от бактериальных лигандов.
Активация пути cGAS – STING во время слияния клеток.
Аберрантное деление клеток и реакция на повреждение ДНК после образования MNGC.
Слияние клеток приводит к образованию микроядер.
Активация cGAS – STING приводит к гибели клеток, но не к продукции IFN типа I.
cGAS – STING-зависимая гибель аутофагических клеток.
Мыши cGAS KO показали слегка замедленную смерть от инфекции в более низкой дозе.
Обсуждение
Материалы и методы
Бактериальные штаммы и конструирование мутантов.
Клеточная инфекция и лечение.
Нокдаун ATG-7 в клетках HepG2.
Анализ экспрессии генов с помощью ПЦР в реальном времени.
Окрашивание по Гимзе для просмотра MNGC.
Анализ цитотоксичности.
Конфокальная визуализация в реальном времени.
Иммунофлуоресценция.
Количественная оценка микроядер.
ELISA.
Иммуноблоттинг.
Статистический анализ.
Этическое заявление.
Доступность данных.
Благодарности
Сноски
Инфинити Х 30.Тест-драйв Infiniti QX70S Дизайн: дата высокой четкости
Infiniti QX50 Технические характеристики
Infinity CuX 50 цены
Продажи автомобиля Технические характеристики
Кузов новый
Новое поколение
Дата выхода (старта продаж) в России
Infiniti QX50 2018 комплектация и цены
Инфинити QX50 Элит * Инфинити QX50 Hi-Tech * Минимальная цена, руб. 2 500 000 2 750 000 Кузов универсал универсал Кол-во дверей 5 5 Привод полный полный Зазор 218 мм 218 мм Длина 4694 мм 4694 мм Ширина 1902 мм 1902 мм Высота 1679 мм 1679 мм Колесная база 2800 мм 2800 мм Объем багажника 895/1699 л 895/1699 л Снаряженная масса 1800 кг 1800 кг Расположение и количество цилиндров R4 турбина R4 турбина Рабочий объем 2.0 л 2,0 л Мощность 272 л.с. 272 л.с. Оборотов в минуту 5000-6000 5000-6000 Крутящий момент 380 Нм 380 Нм Оборотов в минуту 1500-4500 1500-4500 Трансмиссия автомат автомат Количество передач 9 9 Максимальная скорость 230 км / ч 230 км / ч Время разгона 0-100 км / ч 6.5 секунд 6.5 секунды Расход топлива, средний или диапазон 9,1 / 5,2 / 6,7 9,1 / 5,2 / 6,7 Адаптивное освещение поворотов + + Адаптивный круиз-контроль не + R18 алюминиевые диски + не R19 алюминиевые диски не + Аудиосистема премиум-класса + + Бортовой компьютер + + Датчик давления в шинах + + Датчик дождя + + Датчик освещенности + + Дистанционное управление центральным замком + + Задние электрические стеклоподъемники + + Запуск двигателя кнопкой + + Камера заднего вида + + Климат-контроль + + Кожаный салон + + Количество подушек безопасности 6 6 Кондиционер не не Ксеноновые / биксеноновые фары + + Литые диски + + Люк + + Зеркала с подогревом + + Пассивный круиз-контроль + не Передние электрические стеклоподъемники + + Подогрев сидений + + Противотуманные фары + + Регулировка рулевой колонки + + Регулировка сиденья водителя по высоте + + Система кругового обзора не + Система стабилизации + + Усилитель руля + + цвет металлик + + центральный замок + + Аудиосистема OEM с CD и MP3 + + Штатная система навигации не + Штатный парктроник + + Электропривод ствола + + Передние сиденья с электроприводом и памятью параметров + + Сиденье водителя с электроприводом или передние сиденья + + Зеркала с электрической регулировкой + + громкая связь / bluetooth + + Особенности новой архитектуры кузова
Стильный дизайн
Новый дизайн задней части QX 50
Новый профиль продукта Интерьер и оборудование
Новый салон QX50
Мультимедийный комплекс
Шайба контроля среды
Внутренняя отделка Технические характеристики Infiniti QX50 2018-2019
Двигатель 2.0 VC-Turbo с переменной степенью сжатия Фото Инфинити QX50 модель 2019-2020
Содержание обзора:
После такого знакомства многие подумали, что Ку30 — детище концерна VAG и Infinity. Но нет. В целом этот хэтчбек задумывался как конкурент A-класса, Audi A3, BMW 3-Series. Но японцы их всех перехитрили. Они взяли платформу у гораздо более совершенной GLA.И это нормально, что премиальный кроссовер вдруг стал премиальным хэтчбеком на другом конце света. Infiniti Q30 design
Выше уже было сказано, что люк действительно хорош. Компания продвигает свой дизайн как уникальный и неповторимый, все то же самое ранее было показано нам Mazda в концепте Kodo. Но не будем слишком строгими, ведь, несмотря на это, на новинку приятно смотреть. Итак, передняя часть выполнена по всем стандартам бренда: низкая длинная губа, широкий воздухозаборник по центру, небольшие противотуманные фары и многогранная форма.И формы эти непростые, как к большинству бюджетных автомобилей, здесь действительно приложил руку стильный дизайнер с хорошим вкусом.
В профиль новый Infiniti Ku30 больше всего похож на Mazda, но в оправдание хочу сказать, что хэтчбек на немецком шасси отличается более агрессивными формами, что сразу заставляет забыть о сходстве. Волнообразная форма, покатая крыша с узкой линией остекления — смотрится элегантно, а в задней части можно увидеть небольшие грани задних фонарей. Интерьер Infinity Q30
В салоне, как и положено автомобилю такого класса, царят роскошь, красота и стиль. Сразу хочется все потрогать, все пощупать (это для тех, кто говорит о пластике — не трогайте, не разочарует). Пластиковых деталей здесь практически нет — только кожа, кожаный салон уже в базе.
Начнем по порядку, так что мы сели на водительское сиденье и можем регулировать его как душе угодно, есть 17 регулировок в разные стороны, память на две позиции.На руле много кнопок, ни одной новинки, а под ним — подрулевые лепестки. В спортивном режиме они очень полезны, подробнее об этом позже.
Центральная консоль, наверное, выглядит солидно и строго, а не как-то иначе. Здесь огромный набор кнопок, которые четко сгруппированы, поэтому не может быть путаницы. Внизу расположен блок климата, ну и все это венчает большой тачскрин для мультимедиа и навигации. Кстати, выглядит многоуровневая приборная панель просто шикарно.
Задний ряд сидений не отличается свободным пространством, он формованный для трех человек.Спинку можно сложить. Максимальный объем багажника, по официальным данным, составляет 463 литра. Как-то не хватило. Infiniti Q30 Технические характеристики
Хэтчбек, как уже было сказано, позаимствовал платформу у премиальной и достаточно высокотехнологичной GLA. Это помогало хэтчбеку всячески. По словам конструкторов, главной характеристикой для них при настройке подвески и элементов силовой установки были комфорт и плавность хода. Для этого были разработаны специальные амортизаторы с регулировкой электрической жесткости.
Теперь о том, чего мы никогда не увидим. Еще есть полторашка мощностью 109 лошадей, она дизельная. Конечно, турбина не обошлась и без нее, так что 260 Нм крутящего момента — совсем не новость. Зато расход 4,7 литра вполне приятен, учитывая разгон до сотни за 12 секунд и максималку 188 км / ч. Лучший вариант для города найти очень сложно.
Теперь подробнее о мощностях. Речь также идет о дизельной турбированной четверке, которая имеет необычный объем 2,1 литра и развивает ни много ни мало 170 лошадей и 350 Нм. Сразу скажу, это круто. Ведь разгон до сотни займет всего 3 секунды, а максимальная скорость составит 220 км / ч. Неплохой результат, особенно если учесть расход топлива 5,1 литра солярки. И это по стандартам Евро-6. Консенсусное руководство по определению, обнаружению и интерпретации иммуногенной гибели клеток
Введение
Определение МКБ
Источники антигенности по МКБ
Источники адъювантности ICD
Факторы микросреды, влияющие на МКБ
Выявление МКБ при раке
Анализы in vitro с раковыми клетками
Анализы in vitro с иммунными клетками
Модели in vivo
Интерпретация МКБ
Выводы и перспективы
данных до высокого определения. Кроссовер esterno QX70
Эстерно
Салон
Характеристики
Prezzo в России
Test di Guida
Specifiche Infiniti QX56
Семейство автомобилей
Конкретный Infiniti QX50
Prezzi Infinity KuX 50
Интернет-магазин автомобилей Infiniti KuH с подключением к сети
История модели
Esterno
Interni
Технические характеристики и атрибуты
Модель нового поколения Infiniti QX70 2019 использует множество частей и сборки, которые реализуют новые легкие углеродные материалы. Ciò ha согласие aumentare la resistenza e ridurre il peso del veicolo.
Inizio delle vendite